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Calcein釋放實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)方法

時間：2021/11/12閱讀：1582
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實(shí)驗(yàn)步驟


1． 靶細(xì)胞的標(biāo)記　
用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進(jìn)行標(biāo)記,。
 
2． 效-靶細(xì)胞作用　
殺傷實(shí)驗(yàn)在圓底96孔培養(yǎng)板中進(jìn)行,。按E/T比例：50/1,、25/1,、12.5/1,、6.25/1、3.13/1,、1.56/1加入梯度稀釋的效應(yīng)細(xì)胞與標(biāo)記好的靶細(xì)胞各l00μl/孔,，每個比例3復(fù)孔,。同時設(shè)自發(fā)釋放組3復(fù)孔，*釋放組3復(fù)孔,。效-靶細(xì)胞作用96孔培養(yǎng)板在37℃ 5％ CO2培養(yǎng)箱孵育4h后，3000r/min離心5min,，將上清移入新的孔中,。
 
3． 熒光檢測　
用熒光測量儀檢測上清的熒光值(FI)，激發(fā)光為485nm,，發(fā)射光為538nm,。
 
4． 結(jié)果計算
殺傷率(％)=■×100%



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