一,、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和肝素誘導(dǎo)基底膜蛋白提取物內(nèi)的血管生成模型

1.  Matrigel 為一種基底膜提取物,，主要由粘連蛋白,、膠原蛋白,、硫酸肝素,。蛋白多糖和 nidogen/entactin 構(gòu)成,，經(jīng)濾膜,，制備成無(wú)菌液體,。

2.  肝素溶解于無(wú)菌的PBS（pH7.4）中，濃度為16 000單位/ml,，酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（aFGF）經(jīng)預(yù)先配備的無(wú)菌牛血清清蛋白/PBS溶液稀釋為0.25 ug/ml,。

3.  于4℃把各種濃度的肝素或FGF與0.5~1.0ml 的 matrigel 混合，前者體積不超過后者的1%,。

4.  把含有0~100 ng/ml aFGFHE 0~64 ug/ml 肝素的0.5 ml matrigel 用21號(hào)針注射到C57小鼠腹白線皮下,。

5.  注射后matrigel 在皮下迅速形成單一的固體膠，10天后乙（酉迷）麻醉小鼠,，沿腹白線剪開皮膚,，剝離出膠塊。

6.  一部分應(yīng)用Drabkin’方法進(jìn)行血紅蛋白測(cè)定,，另一部分經(jīng)過10%中性福爾馬林固定,、石蠟包埋、切片,、染色,。

7.  于光鏡下進(jìn)行組織學(xué)檢查，記錄血管形成的數(shù)量。

8.  近年來,，還有圓盤狀血管生成系統(tǒng),、大鼠海綿血管生成模型等用于抗血管生成藥物體內(nèi)試驗(yàn)。

二,、內(nèi)皮細(xì)胞粘附分析

1.  把對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的內(nèi)皮細(xì)胞,，用無(wú)血清培養(yǎng)液洗三次，收集并重新懸浮含有0.1%BSA的無(wú)血清培養(yǎng)液中,，濃度為5×105細(xì)胞/ml,。

2.  也可預(yù)先將細(xì)胞與無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋的不同濃度抑制劑在室溫下，孵育60 min,。

3.  將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板內(nèi)（10 ul/孔），與37℃孵育30~90 min,。

4.  用Dulbecco‘PBS液清洗細(xì)胞4 次,，除去未粘附細(xì)胞，粘附細(xì)胞用20%甲醇稀釋的0.5%結(jié)晶紫染色,、固定,、漂洗和空氣晾干。

5.  用比例為1：1的乙醇和0.1 mol/l 構(gòu)櫞酸鈉溶液洗滌染色細(xì)胞,，用酶標(biāo)儀在540 nm 測(cè)定吸收度（OD）,。