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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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qPCR中的絕對(duì)定量是什么,?

時(shí)間:2021/10/14閱讀:4279
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絕對(duì)定量目的是使用PCR測(cè)定目的基因在樣本中的數(shù)量,即拷貝數(shù),。


在絕對(duì)定量中,,想要得到目的基因的拷貝數(shù),需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖需要將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度,,作為模板進(jìn)行PCR。標(biāo)準(zhǔn)品是已知濃度的模板,。


結(jié)束PCR后,,以測(cè)得的CT值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo),,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。


對(duì)待測(cè)樣品的目的基因進(jìn)行檢測(cè)時(shí),只需要將得到的CT值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,,即可計(jì)算出樣品中目的基因的拷貝數(shù),。


需要注意的是:

1、標(biāo)準(zhǔn)品必須來(lái)源可靠,、濃度已知

2,、標(biāo)準(zhǔn)品要和待測(cè)樣品要同時(shí)在儀器中擴(kuò)增

3、只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍,,進(jìn)行樣品濃度的推測(cè)

qPCR中的絕對(duì)定量是什么?

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