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當(dāng)前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>qPCR中的絕對定量是什么,?
絕對定量目的是使用PCR測定目的基因在樣本中的數(shù)量,,即拷貝數(shù),。
在絕對定量中,想要得到目的基因的拷貝數(shù),,需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖需要將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度,作為模板進(jìn)行PCR,。標(biāo)準(zhǔn)品是已知濃度的模板,。
結(jié)束PCR后,以測得的CT值為縱坐標(biāo),,標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo),,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
對待測樣品的目的基因進(jìn)行檢測時(shí),,只需要將得到的CT值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,,即可計(jì)算出樣品中目的基因的拷貝數(shù),。
需要注意的是:
1、標(biāo)準(zhǔn)品必須來源可靠,、濃度已知
2,、標(biāo)準(zhǔn)品要和待測樣品要同時(shí)在儀器中擴(kuò)增
3、只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍,,進(jìn)行樣品濃度的推測
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