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相對定量常用于測定兩個不同樣品中靶基因量的差異,,例如使用實時RT-PCR法定量檢測mRNA水平的實驗,。
進(jìn)行相對定量實驗分析兩個不同樣品的實驗數(shù)據(jù)時,,需要對數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理,,設(shè)置其中一個樣品的靶基因表達(dá)量為“1"。這個樣品稱為校準(zhǔn)品,,常使用表達(dá)恒定的內(nèi)參基因,。
通常,,校準(zhǔn)品歸一化后,待測樣品靶基因表達(dá)量以比“1"增加或降低n倍來表示,,來顯示表達(dá)量的差異,。
值得注意的是,,實驗必須從等量原料中取得校準(zhǔn)品和待測樣品的靶基因,否則比較無意義,。
與絕對定量相比,,相對定量實驗優(yōu)點在于內(nèi)參基因的使用,能規(guī)避實驗操作產(chǎn)生的差異,,而且不需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
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