一,、凈化空氣

在開始任何組織培養(yǎng)工作之前，打開新風系統(tǒng)至少15分鐘,，確保有清潔的空氣流入,。要始終確保沒有任何東西覆蓋它,。每周打開紫外線燈3-4次，最多半個小時,，可以幫助保持你的實驗室無污染,，但你應(yīng)該記住，紫外線只會殺死它直接照射到的微生物,。紫外線照射對眼睛和皮膚也是有害的,，所以在使用遮光罩時，請保持光線關(guān)閉,。在工作前后用消毒劑擦拭超凈臺（大多數(shù)人使用70%的乙醇,，但你也可以使用Incidin濕巾）,。

二、遠離污染物

雖然你很可能是實驗的主要污染源,，但是你*有必須要采取你所及的的預(yù)防措施,，防止細胞受到污染。用70%乙醇擦拭實驗室的所有東西,，包括你戴手套的手,！你還應(yīng)該在開始之前把所有的珠寶和你戴的手表都取下來。此外,，避免不必要的交談,，因為交談會產(chǎn)生微生物氣溶膠，可能會進入超凈臺,。在進入實驗室前*計劃你的實驗是另一個防止污染的好方法,。這聽起來很瑣碎，但往往能在問題出現(xiàn)之前解決大多數(shù)問題,。有了適當?shù)挠媱?，你就可以確切地知道你需要把什么材料帶進實驗室，并且可以帶入之前把它們都擦干凈,。

三,、分裝試劑，保持實驗室整潔

儲物柜最好不要帶護罩,。雜亂無章不僅使你的工作區(qū)很難清潔干凈,，而且還會破壞工作區(qū)周圍的層流氣流。確保只將所需材料帶入工作區(qū)域,。這將給你足夠的空間自由移動而不會造成泄漏,。另外，當液體容器不能立即使用時,，請將其蓋緊,。防止泄漏，但如果發(fā)生任何泄漏,，應(yīng)立即用70%乙醇擦拭,。最后，避免將移液管直接插入培養(yǎng)基瓶中,，而應(yīng)先將溶液倒入一次性無菌管中,，分裝使用不但能方便管理更能避免出現(xiàn)大規(guī)模的污染。

四,、確保細胞不要離開培養(yǎng)箱太久

當你準備東西的時候,，確保你的細胞不會在外面呆太久。培養(yǎng)箱的舒適區(qū)通常在37度左右°5%的二氧化碳,，溫度突然變化（尤其是開空調(diào)的時候）會讓細胞變得焦躁不安,，所以把它們放在無菌培養(yǎng)箱中,。這也意味著任何與細胞接觸的培養(yǎng)基或洗滌緩沖液，如PBS（磷酸鹽緩沖鹽水）,，都應(yīng)該在37°C.這也是大多數(shù)實驗室都有一個37度的水浴目的,。

五、注意細胞的形狀和大小

你應(yīng)該在超凈臺附近放一個光學(xué)顯微鏡,，這樣你可以定期觀察你的細胞（在進入實驗室之前和將它們放入培養(yǎng)箱時）,。這也有助于熟悉你正在使用的細胞系的形態(tài)，以便識別交叉污染,。即使某些哺乳動物細胞系具有相似的形態(tài),，但是觀察細胞是否污染，顯微鏡一定不可少,。

六、合理的設(shè)置細胞傳代

不要偷懶于分割細胞,，而要形成一個常規(guī),。對于大多數(shù)快速生長的細胞系（如HEK293，每16小時增殖一次）,，一周兩次通常有效,。例如，如果你在星期一將細胞稀釋1:5進行傳代,，你應(yīng)該可以在下一個星期四,，或者最遲在星期五進行分裂。最好在細胞板80-85%匯合之前分裂細胞,，因為細胞這個時候?qū)儆谏L鼎盛期,。如果它們達到匯合點，就會進入平頂期,，它們就會停止生長（接觸抑制）,，經(jīng)過傳代后需要時間才能恢復(fù)。這可能會改變它們的生長速率和形態(tài),，使得它們不適宜繼續(xù)用于需要可復(fù)制結(jié)果的實驗,。大多數(shù)細胞培養(yǎng)基含有pH指示劑酚紅（pH范圍6.0（黃色）-8.0（紅色））。血液pH值通常在7.35-7.4左右,，因此哺乳動物細胞對pH值很敏感,。橙色和淺橙色之間的顏色通常都表明細胞需要換液或者已經(jīng)足夠生長，通過分泌乳酸（細胞代謝的副產(chǎn)物,，對細胞有毒）使周圍的介質(zhì)變酸,，這個時候若細胞密度太大就選擇傳代。

七,、細胞狀態(tài)就是力量,！

當用一個新的細胞系開始培養(yǎng)時,，將細胞生長，將其等分成若干小瓶,，冷凍,，除一個外，其余全部儲存在液氮中,。冷凍的小瓶組成了你的主庫存,，而你可以用剩下的小瓶來生長和冷凍額外的細胞，這些細胞可以作為你的工作庫存,。這可以確保您有許多細胞儲存在其原始狀態(tài),，一旦工作細胞變得太老化或污染。您還有之前的庫存細胞可以取代,。這也確保了任何在實驗室需要新細胞的人都可以帶上一瓶“原始狀態(tài)"的主庫存,，而不是“借用"已經(jīng)經(jīng)過多次傳代并可能被污染的細胞。

八,、注意實驗用的細胞代次

注意傳代次數(shù),。細胞在高傳代數(shù)（>30-40倍）時會改變它們的生長速度和形態(tài)，這取決于細胞系,，所以舊細胞應(yīng)該退役,！相反，第3-4代年輕的細胞太年輕,，不應(yīng)該在立即用于重要的轉(zhuǎn)染實驗,。額外的傳代可以讓你的細胞獲得穩(wěn)定的生長速度。

在你的盤子和/或燒瓶上貼上你的名字,、日期,、你使用的細胞系和它的通道號是一種很好的做法。特別是在一個多人從事不同工作的實驗室里,，這將有助于你避免意外混合造成交叉污染,，也有助于你保持良好的實驗記錄。

九,、及時滅菌是細胞的狂歡,！

最后，但并非最不重要的一點是,，任何用于再利用的實驗室材料（例如,，用于液體廢物的巴斯德移液管）在每次使用前都應(yīng)消毒。此外,，所有受污染的液體和固體廢物在處理前應(yīng)進行高壓滅菌,。