western blot 對絕大多數(shù)實驗新人而言,，絕對是心中痛，一碰就要抓狂,。沒辦法,誰讓導師發(fā)話了,，WB 做不好,，延畢就是分分鐘的事兒。這還真是讓小伙伴們感嘆道,，WB 想說愛你不容易,。那么為了*馴服 WB，獲得漂亮且理想的實驗結(jié)果,，一個良好的參照體系就絕對是*的存在,。 

一般而言，良好的參照體系包括： 

*體重計（分子量 marker）：可確定蛋白條帶對應的分子量大小 

*光桿司令（空白對照）：不加一抗和二抗,，用于檢測膜的性質(zhì)的封閉效果 

*好榜樣（陽性對照）：已知量標準產(chǎn)物的正對照,，可檢測抗體的工作效率

*打醬油的（陰性對照）：不表達靶蛋白的組織或樣品，檢測抗體的特異性 

*單飛者（二抗對照）：不加一抗,，檢測二抗的特異性,。 

*校正者（內(nèi)參對照）：檢測標本系統(tǒng)和抗體系統(tǒng)，減少蛋白定量,、上樣過程中的誤差

內(nèi)參君的初次登場 

在此,，小編就帶領(lǐng)大家一起來認識認知這位“有名"的內(nèi)參君吧。內(nèi)參（Internal Control）,，簡而言之,，一般指的是由管家基因編碼表達的蛋白（Housekeeping Proteins），因其表達恒定被用于檢測蛋白表達水平變化時的參照物,，可確保實驗結(jié)果的準確性,。

Tips: 

1）在一些文獻報道中,，Erk2、TATA bindingprotein(TBP)以及 c-Jun,、c-Fos 等也可被用于核蛋白的內(nèi)參,。 

2）內(nèi)參的選擇需要考慮實際的實驗環(huán)境。 

eg：在細胞增殖相關(guān)試驗中,，c-Jun 由于自身表達變化就不適合做內(nèi)參;而在凋亡實驗時,，TBP、Lamin 等也不適合作為內(nèi)參,。因此設計實驗方案的時候應該考慮這些因素并查詢相應文獻,，在實驗過程中也應該注意如果內(nèi)參表達出現(xiàn)異常，應考慮這方面因素,。

鋒芒畢露的內(nèi)參君 

正所謂，養(yǎng)兵千日,，用在一時,。可是很多實驗菜鳥在選好內(nèi)參之后,，對下一步如何發(fā)揮內(nèi)參君的本領(lǐng)感到一愁莫展,。那么以下三個妙招可一解大家的燃眉之急。 

1,、超級簡便的標記內(nèi)參使用法：只要在二抗孵育時加入 HRP 標記內(nèi)參抗體,，按照正常操作即可。 

2 ,、普通內(nèi)參：當目的蛋白的分子量大小與選用的內(nèi)參蛋白分子量相差不大時,，可以*行目的蛋白的抗體溫育顯色和檢測。然后使用膜再生液（P1650）洗掉膜上的抗體,，重新進行內(nèi)參蛋白的抗體溫育,、顯色檢測。

3 ,、當目的蛋白的分子量大小與選用的內(nèi)參蛋白分子量大小相差比較明顯情況下,，可以在轉(zhuǎn)膜后預染，根據(jù)蛋白質(zhì) Marker 的大小將膜剪為大分子量和小分子量兩部分,，使內(nèi)參蛋白與目的蛋白分開,。然后兩塊膜分別與內(nèi)參蛋白抗體以及目的蛋白抗體進行溫育，二抗溫育以及顯色,。 如此下來，各位小伙伴就可以坐等鋒芒畢露的內(nèi)參君為我們擒獲漂亮且理想的內(nèi)參圖片,。