血清沉淀是否會影響細胞生長,？如何避免？

時間：2021/8/18閱讀：1857

血清沉淀是否會影響細胞生長？如何避免,？

血清是細胞培養(yǎng)試劑中最基礎(chǔ)普遍的試劑之一,，之前我們已經(jīng)介紹過了有關(guān)特殊加工工藝血清的一些小知識（了解和認識胎牛血清，特殊加工工藝血清,，您知道幾種,？），那么今天我們將繼續(xù)了解有關(guān)血清沉淀與血清熱滅活的相關(guān)知識~

血清沉淀是否會影響細胞生長,？如何避免,？

血清沉淀

1. 血清沉淀是什么？

血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀,，其成分有多種類型,，產(chǎn)生的原因有很多。主要有纖維蛋白（絮狀沉淀）,、甲胎蛋白,、脂蛋白、冷凝集素,、玻粘連蛋白,、磷酸鈣（顯微鏡下小黑點沉淀）、膽固醇等,。

●纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中,，血清采集,、過濾（3 次 0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀,。

血清沉淀是否會影響細胞生長,？如何避免,？

▲ 纖維蛋白沉淀圖

●磷酸鈣（Calcium Phosphate）

這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁,。當血清在 37℃保存時,，這種現(xiàn)象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在,。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動,，常被誤認為是微生物污染。

●其他成分（Other）

血清中的其他成分也會形成沉淀,，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等,。

2. 沉淀是如何形成的？

造成沉淀的主要原因是溫度的改變,、熱滅活,、反復(fù)凍融、長期儲存于2-8℃或者室溫,。

3. 血清沉淀會影響細胞培養(yǎng)嗎,？

我們在出廠前都會對血清進行一系列質(zhì)檢測試，確保血清質(zhì)量達到嚴格標準,。血清測試和細胞培養(yǎng)經(jīng)驗也表明,，其沉淀成分不會影響血清作為細胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點得到了眾多用戶和其他血清供應(yīng)商的肯定,。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集,，形成肉眼可見的沉淀。

磷酸鈣顆粒經(jīng)常會被當成微生物污染而引發(fā)不必要的擔憂,。一般情況下,，當操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時，常將其存放在 4℃冰箱中觀察,，并考慮接下來是否繼續(xù)使用,。但這樣會使沉淀進一步增多，反而會使血清更加渾濁,，進而誤以為存在血清污染,。并且，在倒置顯微鏡下,，可在血清中觀察到小黑點（磷酸鈣顆粒的布朗運動）,，更容易使人誤以為存在微生物污染,。

為防止這類誤解的產(chǎn)生，我們不建議用戶培養(yǎng)血清來驗證是否存在污染,，而是將血清直接接種在細菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),，以觀察是否有細菌的增殖。并且,，進行革蘭氏染色,，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認是否存在微生物污染。

Zeta Life血清經(jīng)過3次0.1μm過濾除菌,，低內(nèi)毒素,，通過血紅蛋白測試合格，經(jīng)美國農(nóng)業(yè)部（USDA)認證,。

4. 如何避免血清沉淀

●正確解凍

首先,，應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于4℃冰箱緩慢解凍,，最后置于室溫完成解凍,。如果直接從-20℃拿到室溫或37℃水浴解凍，則非常容易產(chǎn)生沉淀,。在解凍過程中,，請注意，應(yīng)時不時緩慢搖晃血清瓶,，可減少沉淀的產(chǎn)生,。為避免反復(fù)凍融，建議您將血清分裝使用,。

●使用和保存注意事項

血清沉淀很難預(yù)測和避免,，出現(xiàn)沉淀后也無需擔憂，這并不會影響血清的品質(zhì),。已知血清沉淀在以下條件下會有增多的可能：

1) 熱滅活,；

2) 37℃培養(yǎng)；

3) 反復(fù)凍融,；

4) 伽馬射線照射,；

5) 2-8℃長期保存；

6) 長期保存于可自動化霜的冰箱中（溫度不穩(wěn)定）,；

●血清沉淀的形成機理多種多樣,，具體的機理尚不十分明確。我們尚不能準確預(yù)測和控制血清沉淀的產(chǎn)生,。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象,，這一點可以在各品牌網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問題的聲明上得到證實。

5. 有沉淀時如何處理,？

我們建議您采用2000rpm離心5分鐘,，取上清使用就好,，比過濾方便，不需要另外準備濾芯和針筒,，且不容易污染。

總結(jié)建議

血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于正?，F(xiàn)象,，不會影響到血清的品質(zhì)，對細胞培養(yǎng)也不會產(chǎn)生影響,，大家可以放心使用,，若不立即使用，血清應(yīng)保存在-20℃以下,。

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