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中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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血清系列
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
支原體清除
細(xì)胞凍存
實(shí)驗(yàn)耗材
分子試劑
細(xì)胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養(yǎng)基
ELISA試劑盒
TOYOBO(東洋紡)
ZYMO RESEARCH
Greiner(格瑞納)
IKA(艾卡)
化學(xué)發(fā)光底物(ECL)
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細(xì)胞生物學(xué)
Corning康寧
解離試劑
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
原代細(xì)胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細(xì)胞系
生化試劑盒
環(huán)境檢測系列試劑盒(AKEN)
類器官培養(yǎng)
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質(zhì)
細(xì)胞因子分子
生物樣本庫
蛋白研究系列

了解和認(rèn)識(shí)胎牛血清,,特殊加工工藝血清,您知道幾種,?

時(shí)間:2021/8/18閱讀:11102
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血清作用原理:

正因?yàn)檠鍋碓从趧?dòng)物,,含有細(xì)胞培養(yǎng)中所需的各種營養(yǎng)(血漿蛋白、多肽,、脂肪,、碳水化合物、生長因子,、激素,、無機(jī)物等),所以奠定了血清是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中最基本普遍試劑的基礎(chǔ),。血清通常用作細(xì)胞生長的添加物,,擁有多種功能和用途,如:富含大分子蛋白,,低分子量的營養(yǎng)素,,作為氨基酸、碳水化合物,、維生素的額外來源,;提高介質(zhì)的緩沖能力;可結(jié)合或中和有毒成分,;減少細(xì)胞氧化應(yīng)激,,減少細(xì)胞凋亡;提供促進(jìn)生長的因子,,有助細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境,。


▽ 成分表

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血清通過牛齡進(jìn)行分類,,可大致分為:

胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS),、國產(chǎn)胎牛血清(并無明確定義,,但通常用此命名)、新生牛血清(Newborn Calf Serum,,簡稱NBCS,,或稱小牛血清)、成年牛血清(Adult Bovine Serum,,簡稱ABS),。

不同牛齡血清所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子,、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同,。


▽ 比較

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一,、透析胎牛血清

常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)需要添加血清來維持細(xì)胞的增殖能力,,盡管血清可以滿足一般細(xì)胞培養(yǎng)需求,但在進(jìn)行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)記特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中,,仍需要去除某些特定的成分,,常用的去除方法有透析。透析是將血清循環(huán)通過中空纖維,,并在血清中補(bǔ)充生理鹽水以維持滲透壓,,移除分子量小于10,000Da的小分子,如氨基酸,、葡萄糖,、鹽離子和未結(jié)合的蛋白等。
因此透析胎牛血清主要用于關(guān)注小分子濃度的特殊研究,,包括:研究蛋白質(zhì)組學(xué),,同位素標(biāo)記、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和報(bào)告基因分析、報(bào)告基因細(xì)胞系的篩選等,。

①細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(簡稱SILAC)

這是一項(xiàng)以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),,全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,,來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),,一般培養(yǎng)5-6代,細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記,。然后質(zhì)譜分析,,即可比較經(jīng)過不同處理的細(xì)胞,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化,。它還可用于正常細(xì)胞與病理狀態(tài)細(xì)胞二者的比較,。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,這時(shí)就需要用到透析胎牛血清,,以保證摻入細(xì)胞蛋白中的氨基酸均為標(biāo)記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸),。

②工程細(xì)胞株的篩選

以常見的工程細(xì)胞株CHO-DFGRˉ為例,該細(xì)胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR),,必須在添加了次黃(嘌)漂呤,、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長的細(xì)胞克隆,。通過甲氨蝶呤(MTX)進(jìn)一步篩選,可進(jìn)一步得到能表達(dá)大量目的蛋白的細(xì)胞克隆,。這時(shí)的胎牛血清由于不含有次黃(嘌)漂呤和胸腺嘧啶等,,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,參與陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選,。

研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒,、鋅對(duì)某種類型細(xì)胞增殖、分化的影響,。這時(shí)也需要用透析胎牛血清,,以避免培養(yǎng)體系中天然存在的這些物質(zhì)的干擾。



二,、碳吸附胎牛血清

在進(jìn)行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)記特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中,,需要去除某些特定的背景成分,常用的去除方法有碳吸附,,使用活性碳和右旋糖苷去除血清中的激素,。

活性炭能夠結(jié)合脂溶性分子,通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度,,如雌二醇,、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、孕酮,、B類維生素,、睪酮及T3、T4,、前列腺素等,。該血清適用于上述一些分子可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)中,對(duì)于那些需要這些分子的細(xì)胞培養(yǎng),,也可能降低細(xì)胞生長性能,。

碳吸附胎牛血清用于體外培養(yǎng),去除背景值以驗(yàn)證激素的作用效果,,研究包括醇類受體連接,,細(xì)胞受體類固醇調(diào)節(jié),各種組織激素分泌和甲狀腺激素功能,。

適用于:培養(yǎng)干細(xì)胞,、原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞,、人類癌細(xì)胞,、人類骨髓細(xì)胞、白血病細(xì)胞,、人類胚肺成纖維細(xì)胞,、人類腦神經(jīng)細(xì)胞和瘤細(xì)胞等細(xì)胞。



三,、去外泌體胎牛血清

外泌體由分泌性細(xì)胞分泌,,存在于所有的生物體液中,包括血液、尿液,、唾液,、乳汁和腦脊液中。它們隨后被其他細(xì)胞吸收并發(fā)揮生物活性,。


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△外泌體


胎牛血清中含有大量的外泌體,,但在外泌體研究中,如果仍然使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,,并通過收集上清液來提取外泌體進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,那么胎牛血清中本身的牛源外泌體將會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)分析造成極大的干擾,。去外泌體血清是將由無菌采集的健康胎牛血清經(jīng)過過濾,,去除≥99%的胎牛血清內(nèi)源外泌體,,還可使細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)與未處理的胎牛血清具有相同的增殖速率和形態(tài),。

因此,,去外泌體血清主要用于細(xì)胞體外的增殖培養(yǎng),收獲目標(biāo)細(xì)胞的外泌體,。



四,、四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)胎牛血清

普通胎牛血清中一般會(huì)含有四環(huán)素(Tet),,當(dāng)使用非常敏感的Tet-誘導(dǎo)的基因表達(dá)系統(tǒng)時(shí),研究人員往往會(huì)遇到非預(yù)期的基因表達(dá)的問題,,為了確保精確地基因表達(dá),,建議使用四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)胎牛血清,應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)(Tet-on, Tet-off),以及其它對(duì)四環(huán)素敏感的實(shí)驗(yàn)中,。



五,、低IgG胎牛血清

IgG是胎牛血清中發(fā)現(xiàn)的最常見的抗體,低IgG血清主要通過A-Sepharose處理,使血清能夠保留原有的生物活性,同時(shí)降低血清的IgG含量,,低于5μg/ml,。低IgG胎牛血清適用于培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。
因此,,低IgG胎牛血清有利于單克隆抗體的純化,,用于研究抗體和病毒反應(yīng),、細(xì)胞表面抗原表位,。



六、去脂胎牛血清

去脂胎牛血清通過固體基質(zhì)脫脂作用去除內(nèi)源性脂類,、甘油三酯和膽固醇,,含量僅為標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的1/3。

去脂胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中用量較多,,其含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成分,,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能,。

①提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物以及主要的低分子營養(yǎng)物。

②提供結(jié)合蛋白,,能識(shí)別維生素,、脂類、金屬和其他激素等,,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力,。

③有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱源質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用,。

④是細(xì)胞貼壁,、鋪展在塑料培養(yǎng)基上所需因子來源。

⑤起酸堿緩沖液作用,。

⑥提供蛋白酶抑制劑,,使在細(xì)胞傳代時(shí)剩余胰蛋白酶失活,,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

去脂胎牛血清可用于蛋白激酶CK2-α’與腺樣囊性癌肺轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究:

①蛋白激酶是酶類這個(gè)家族中最龐大的一員,,被用來完成蛋白磷酸化作用的催化,,這是控制細(xì)胞生命活動(dòng)中最通常的機(jī)制。其中*有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2,。蛋白激酶CK2(protein kinase CK2, PKCK2),,過去曾經(jīng)被稱為酪蛋白激酶-2或Ⅱ(cascin kinase2 or Ⅱ)。它是由兩個(gè)催化亞基(aa’)和兩個(gè)調(diào)節(jié)亞基(ββ)構(gòu)成的不均一四聚體,。

②蛋白激酶CK2是由兩個(gè)分別為42—44KDa和38KDa的aa’ββ型異四聚體結(jié)構(gòu),。該結(jié)構(gòu)很穩(wěn)定,在體外只有在變性的條件下才能被解離。除了細(xì)胞基質(zhì),一些病毒蛋白也被CK2所磷酸化,。蛋白激酶CK2在轉(zhuǎn)錄,、信號(hào)、增殖,,并且在導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的各細(xì)胞步驟中發(fā)揮作用,。



七、熱滅活系列血清

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件,,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,,啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化,。在免疫學(xué)研究中,培養(yǎng)ES細(xì)胞,、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),,推薦使用熱滅活血清。
實(shí)驗(yàn)顯示,,熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是非必需的,,對(duì)于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對(duì)于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長速率降低,,沉淀物還會(huì)顯著增多,,不利于細(xì)胞觀察。因此,,若非必須,,不需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。
如若需要使用熱滅活血清,,可通過提高血清溫度到56℃,,并且保持該溫度30分鐘完成。建議加放空白對(duì)照(同體積水)使用溫度計(jì)測溫,以測得溫度為56℃時(shí)為計(jì)時(shí)起始點(diǎn),,加熱中可不時(shí)輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清,。



☆ 血清的使用方法

血清從冰凍區(qū)中取出后(切勿直接將血清從-20℃置入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀),,放置于2℃~8℃中使之融化,解凍過程中間歇地輕輕搖晃均勻,,待全部溶解后再分裝或直接使用。*融解的血清從4℃拿出,,按要求比例(5%-20%)加基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置成*培養(yǎng)基,,建議使用不完時(shí),置于4℃冰箱存放并于1-2周內(nèi)用完,。



☆ 使用血清時(shí)的注意事項(xiàng)

血清沉淀的物質(zhì)主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),,脂蛋白,冷凝集素,,玻連蛋白,,胎球蛋白,磷酸鈣(顯微鏡下小黑點(diǎn)沉淀),,膽固醇等,。

哪些原因容易導(dǎo)致血清沉淀:

1、溫度改變太大,,血清由-20℃直接放入37℃解凍,,因溫度改變劇烈容易導(dǎo)致沉淀。

2,、血清在室溫或4℃冰箱放置時(shí)間太久,,血清中的不穩(wěn)定成分會(huì)被破壞,影響細(xì)胞生長效果,;導(dǎo)致血清品質(zhì)變差,,也會(huì)產(chǎn)生沉淀。

3,、血清分裝凍存時(shí),,注意在不產(chǎn)生氣泡的情況下?lián)u晃均勻,避免因血清成分濃度改變產(chǎn)生沉淀,。

4,、血清滅活后容易產(chǎn)生沉淀,如需使用滅活血清,,請按56℃,,30分鐘,輕微搖晃原則操作,滅活溫度過高,、時(shí)間過長,、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。

5,、如有血清沉淀,,分裝后進(jìn)行離心處理,建議400g離心5分鐘,,取上清使用,。



結(jié)語:

血清種類這么多,您找到了您需要的它嗎,?如您還在尋尋覓覓,,現(xiàn)在安培生物為您精選幾款經(jīng)美國農(nóng)業(yè)部(USDA)認(rèn)證,低內(nèi)毒素,,血紅蛋白測試合格的進(jìn)口血源胎牛血清~


品牌

名稱

血源

貨號(hào)

規(guī)格

美國Zeta Life

澳洲胎牛血清

澳洲

Z7010FBS-500,、Z7010FBS-100

500ml/100ml

美國Zeta Life

超低內(nèi)毒素胎牛血清

哥倫比亞

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500ml/100ml

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Z7181FBS-500,、Z7181FBS-100

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法國胎牛血清

法國

Z7186FBS-500、Z7186FBS-100

500ml/100ml

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