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血清作用原理:
正因為血清來源于動物,,含有細胞培養(yǎng)中所需的各種營養(yǎng)(血漿蛋白,、多肽、脂肪,、碳水化合物,、生長因子、激素,、無機物等),所以奠定了血清是細胞培養(yǎng)實驗中最基本普遍試劑的基礎,。血清通常用作細胞生長的添加物,,擁有多種功能和用途,如:富含大分子蛋白,,低分子量的營養(yǎng)素,,作為氨基酸、碳水化合物,、維生素的額外來源,;提高介質(zhì)的緩沖能力;可結(jié)合或中和有毒成分,;減少細胞氧化應激,,減少細胞凋亡;提供促進生長的因子,,有助細胞適應環(huán)境,。
▽ 成分表
血清通過牛齡進行分類,,可大致分為:
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS),、國產(chǎn)胎牛血清(并無明確定義,,但通常用此命名)、新生牛血清(Newborn Calf Serum,,簡稱NBCS,,或稱小牛血清)、成年牛血清(Adult Bovine Serum,,簡稱ABS),。
不同牛齡血清所含的促細胞生長因子、促貼附因子,、激素及其他活性物質(zhì)等組分與比例不同,。
▽ 比較
一、透析胎牛血清
①細胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標記技術(shù)(簡稱SILAC)
這是一項以質(zhì)譜為基礎的定量蛋白質(zhì)組學技術(shù),,全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞,,來標記細胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),,一般培養(yǎng)5-6代,,細胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標記。然后質(zhì)譜分析,,即可比較經(jīng)過不同處理的細胞,,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。它還可用于正常細胞與病理狀態(tài)細胞二者的比較,。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,,這時就需要用到透析胎牛血清,以保證摻入細胞蛋白中的氨基酸均為標記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸),。
②工程細胞株的篩選
以常見的工程細胞株CHO-DFGRˉ為例,,該細胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR),必須在添加了次黃(嘌)漂呤,、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能得以存活,。如將含有目的基因與DHFR基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞,則可以得到在不含上述添加劑的培養(yǎng)基上也能生長的細胞克隆,。通過甲氨蝶呤(MTX)進一步篩選,,可進一步得到能表達大量目的蛋白的細胞克隆。這時的胎牛血清由于不含有次黃(嘌)漂呤和胸腺嘧啶等,,也常作為選擇培養(yǎng)基的一部分,,參與陽性轉(zhuǎn)染細胞克隆的篩選。
二,、碳吸附胎牛血清
活性炭能夠結(jié)合脂溶性分子,通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度,,如雌二醇,、皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮,、孕酮,、B類維生素、睪酮及T3,、T4,、前列腺素等,。該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結(jié)果的實驗中,對于那些需要這些分子的細胞培養(yǎng),,也可能降低細胞生長性能,。
碳吸附胎牛血清用于體外培養(yǎng),去除背景值以驗證激素的作用效果,,研究包括醇類受體連接,,細胞受體類固醇調(diào)節(jié),各種組織激素分泌和甲狀腺激素功能,。
適用于:培養(yǎng)干細胞,、原代細胞、神經(jīng)細胞,、人類癌細胞,、人類骨髓細胞、白血病細胞,、人類胚肺成纖維細胞,、人類腦神經(jīng)細胞和瘤細胞等細胞。
三,、去外泌體胎牛血清
△外泌體
胎牛血清中含有大量的外泌體,但在外泌體研究中,,如果仍然使用胎牛血清培養(yǎng)細胞,,并通過收集上清液來提取外泌體進行實驗,那么胎牛血清中本身的牛源外泌體將會對實驗分析造成極大的干擾,。去外泌體血清是將由無菌采集的健康胎牛血清經(jīng)過過濾,,去除≥99%的胎牛血清內(nèi)源外泌體,還可使細胞在培養(yǎng)時與未處理的胎牛血清具有相同的增殖速率和形態(tài)。
四,、四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)胎牛血清
五、低IgG胎牛血清
六,、去脂胎牛血清
去脂胎牛血清在細胞培養(yǎng)中用量較多,其含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成分,,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),,具有極為重要的功能。
①提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物以及主要的低分子營養(yǎng)物。
②提供結(jié)合蛋白,,能識別維生素,、脂類、金屬和其他激素等,,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力,。
③有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱源質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
④是細胞貼壁,、鋪展在塑料培養(yǎng)基上所需因子來源,。
⑤起酸堿緩沖液作用。
⑥提供蛋白酶抑制劑,,使在細胞傳代時剩余胰蛋白酶失活,,保護細胞不受傷害。
去脂胎牛血清可用于蛋白激酶CK2-α’與腺樣囊性癌肺轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究:
①蛋白激酶是酶類這個家族中最龐大的一員,,被用來完成蛋白磷酸化作用的催化,,這是控制細胞生命活動中最通常的機制。其中*有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2,。蛋白激酶CK2(protein kinase CK2, PKCK2),,過去曾經(jīng)被稱為酪蛋白激酶-2或Ⅱ(cascin kinase2 or Ⅱ)。它是由兩個催化亞基(aa’)和兩個調(diào)節(jié)亞基(ββ)構(gòu)成的不均一四聚體,。
七、熱滅活系列血清
☆ 血清的使用方法
血清從冰凍區(qū)中取出后(切勿直接將血清從-20℃置入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀),,放置于2℃~8℃中使之融化,解凍過程中間歇地輕輕搖晃均勻,,待全部溶解后再分裝或直接使用,。*融解的血清從4℃拿出,按要求比例(5%-20%)加基礎培養(yǎng)基配置成*培養(yǎng)基,,建議使用不完時,,置于4℃冰箱存放并于1-2周內(nèi)用完。
☆ 使用血清時的注意事項
血清沉淀的物質(zhì)主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),,脂蛋白,,冷凝集素,玻連蛋白,,胎球蛋白,,磷酸鈣(顯微鏡下小黑點沉淀),膽固醇等,。
哪些原因容易導致血清沉淀:
1,、溫度改變太大,血清由-20℃直接放入37℃解凍,,因溫度改變劇烈容易導致沉淀,。
2、血清在室溫或4℃冰箱放置時間太久,,血清中的不穩(wěn)定成分會被破壞,,影響細胞生長效果;導致血清品質(zhì)變差,,也會產(chǎn)生沉淀,。
3、血清分裝凍存時,,注意在不產(chǎn)生氣泡的情況下?lián)u晃均勻,,避免因血清成分濃度改變產(chǎn)生沉淀。
4,、血清滅活后容易產(chǎn)生沉淀,如需使用滅活血清,請按56℃,,30分鐘,,輕微搖晃原則操作,滅活溫度過高,、時間過長,、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。
5,、如有血清沉淀,,分裝后進行離心處理,建議400g離心5分鐘,,取上清使用,。
結(jié)語:
血清種類這么多,您找到了您需要的它嗎,?如您還在尋尋覓覓,,現(xiàn)在安培生物為您精選幾款經(jīng)美國農(nóng)業(yè)部(USDA)認證,低內(nèi)毒素,,血紅蛋白測試合格的進口血源胎牛血清~
品牌 | 名稱 | 血源 | 貨號 | 規(guī)格 |
美國Zeta Life | 澳洲胎牛血清 | 澳洲 | Z7010FBS-500,、Z7010FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 超低內(nèi)毒素胎牛血清 | 哥倫比亞 | Z7180FBS-500、Z7180FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 南美胎牛血清 | 烏拉圭 | Z7181FBS-500,、Z7181FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 南美胎牛血清 | 巴西 | Z7185FBS-500,、Z7185FBS-100 | 500ml/100ml |
美國Zeta Life | 法國胎牛血清 | 法國 | Z7186FBS-500、Z7186FBS-100 | 500ml/100ml |
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