Advanced 系列高效 DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑操作說明
產(chǎn)品名稱
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
包裝規(guī)格
1.產(chǎn)品貨號(hào)：AD600025,、AD600050、AD600075,、AD600100,、AD600150,、AD600300；
2.規(guī)格：0.25ml,、0.5ml,、0.75ml、1ml,、1.5ml,、3ml；
儲(chǔ)存條件
常溫運(yùn)輸,，4℃保存,，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。
材料準(zhǔn)備
1.RNA 濃度 20 uM /L,。
2.質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水,；②無內(nèi)毒素 ）。
操作步驟
1.提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。
2. 核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜止 10-15 分鐘,。
3.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻,；細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清,。
4.細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液,。
5.分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9小時(shí)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá),。
注意事項(xiàng)
? 1,、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer,。溶解于 Buffer的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降 80%左右,，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。
? 2,、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左右,，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗（推薦使用 Qiagen,、TIANGEN,、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。
? 3,、復(fù)合物的制備過程中是絕對(duì)不能用其他任何試劑對(duì)核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋,，只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進(jìn)行了稀釋會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失,。
? 4,、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。
? 5,、轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液,，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時(shí)后換液。
? 6,、原代細(xì)胞,、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。
轉(zhuǎn)染操作示意圖
不同轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)各成分推薦用量
僅供科學(xué)研究使用,，禁止用于它用
