特性 | 提純方法 | 原理 | 優(yōu)缺點(diǎn) |
密度 | 超速離心/差速離心（UC） | 樣本與雜質(zhì)的密度差異 | 缺點(diǎn)：耗時(shí)長，回收率低,，重復(fù)性差,，純度低 優(yōu)點(diǎn)：操作規(guī)范，難度低,，適用性廣 |
密度梯度離心 | 使用不同密度的分離介質(zhì) | 缺點(diǎn)：耗時(shí)長,，操作繁瑣，回收率低 優(yōu)點(diǎn)：外泌體純度高 | |
尺寸 | 尺寸排阻色譜 （SEC） | 基于分子大小差異,，與超濾濃縮相結(jié)合,。 | 缺點(diǎn)：樣本經(jīng)過流動(dòng)相會(huì)被稀釋 優(yōu)點(diǎn)：簡單、經(jīng)濟(jì),、大規(guī)模,、純度高 |
功能 | 免疫親和法 | 基于抗原-抗體特異性反應(yīng) | 缺點(diǎn)：耗時(shí)，成本高，要求高,，外泌體的異質(zhì)性影響 優(yōu)點(diǎn)：特異性,，純度高，能分離出特定的外泌體亞類 |
聚合物沉淀法 | 聚合物降低外泌體溶解度 | 缺點(diǎn)：純度極低,，外泌體易受污染 優(yōu)點(diǎn)：簡便快捷,、可處理大樣本量，易于多方法結(jié)合使用 | |
磷酯酰絲氨酸（PS）親和法 | 外泌體磷酸基團(tuán)與金屬氧化物特異性結(jié)合 | 缺點(diǎn)：不適合大樣本分離,，可能有雜質(zhì) 優(yōu)點(diǎn)：使用方便,，純度高，形態(tài)完整,，耗時(shí)短 | |
微流控 | 多種方法整合 | 缺點(diǎn):門檻較高,，只適合小樣本分離 優(yōu)點(diǎn)：高效方便，純度高,，污染風(fēng)險(xiǎn)小,，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化診斷 |
外泌體的純化方法多種多樣，為不同的研究提供相應(yīng)的需求,，加上還有新的提純方法在開發(fā)當(dāng)中,，未來將會(huì)有更多的選擇。那么問題隨之而來,，我們應(yīng)該用什么手段來量化不同方法的優(yōu)劣呢,？下面我們將利用瑞芯智造（深圳）科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的納米庫爾特粒度儀（Nanocoulter）測試的不同純化方法的數(shù)據(jù)對比來說明問題。
將相同的外泌體樣品通過四種不同的提純手段進(jìn)行純化,，然后再用納米庫爾特粒度儀進(jìn)行測試,， 將不同提純方法的數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，從最終提純樣品的粒徑均一性和濃度高低來判斷其純化程度和樣品的損失量,，由此比較不同方法的優(yōu)劣,。下圖為用納米庫爾特粒度儀測試的A、B,、C,、D四種純化方法提純的外泌體樣品的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，可以看出利用不同方法純化后的外泌體樣品粒徑和濃度分布都表現(xiàn)出不小的差異,。
圖1：納米庫爾特粒度儀（瑞芯智造）測試外泌體粒徑,、濃度分布圖
下面我們將用納米庫爾特粒度儀測試的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，并將其整合到一起進(jìn)行繪圖,，這樣能夠更為清晰的分辨這幾種純化方法的區(qū)別,。
圖2：納米庫爾特粒度儀（瑞芯智造）測試外泌體粒徑、濃度對比圖
從上面這張圖我們可以直觀的看出A,、B,、C,、D四種不同的提純方法所表現(xiàn)出的明顯差異，A明顯優(yōu)于其他三種,，提純的外泌體不但粒徑均一,，且濃度也更高；B與A較為接近,，與之相比粒徑分布略寬,，濃度略低；C與D的樣品損失量過高,，C損失尤為嚴(yán)重,，粒徑分布均一性也不是很好，是最差的,。
瑞芯智造的納米庫爾特粒度儀從粒徑和濃度的視角對不同的外泌體純化方法進(jìn)行區(qū)分,，以最直接的測量方式得到準(zhǔn)確的結(jié)果,，而這需要很高的測量精度,，不然不足以體現(xiàn)出其細(xì)微的區(qū)別，其應(yīng)用電阻感應(yīng)脈沖法（RPS）作為底層原理,，該原理已有半個(gè)世紀(jì)的發(fā)展歷史,，又稱電阻感應(yīng)脈沖法，電解質(zhì)溶液中的顆粒通過納米孔時(shí),，在恒電流設(shè)計(jì)的電路中,，導(dǎo)致電極間電阻產(chǎn)生瞬時(shí)變化從而產(chǎn)生電脈沖，電脈沖幅度與粒徑成正比,。作為電學(xué)檢測原理方法,，RPS 不同于光學(xué)檢測方法,如動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、納米粒子示蹤(NTA),、納米流式,，與樣本光學(xué)性質(zhì)無關(guān)。納米庫爾特粒度儀可在單顆粒水平實(shí)現(xiàn)納米顆粒的多參數(shù)表征,，粒徑測量精度可媲美電鏡,，3-5min就可精準(zhǔn)得到樣品完整，真實(shí)的粒徑分布,。對促進(jìn)外泌體的研發(fā)生產(chǎn)具有重要作用,。
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