在養(yǎng)細胞的過程中，實驗室污染仍是普遍存在的問題,。在這個過程中,，使用的試劑、耗材,、環(huán)境,、操作等都有可能造成污染，如支原體污染,、細菌污染等[1],。污染會影響細胞的生長和形態(tài)，甚至導致細胞功能,、性質發(fā)生改變,，進而影響實驗研究的準確性。
因此,，對實驗室污染進行預防,、排查與清除，是至關重要的,。本期細胞學堂為您整理了一份實驗室污染最-全應對攻略,，幫助您快速上手清除污染。
01
污染的預防
嚴格執(zhí)行細胞實驗室規(guī)章制度
不斷完善無菌實驗室規(guī)章制度,，加強無菌實驗室的管理,。外來進修人員、實習學生進入實驗室前要進行培訓和教育,，掌握一定的基本理論,、實驗技能、操作規(guī)程后，在帶教老師的指導下方可進行實驗操作,。
培養(yǎng)箱,、無菌室、凈化臺定期消毒
工作臺實驗前紫外燈消毒30 min,，實驗后用75%的酒精擦拭臺面,；實驗廢棄物高壓蒸汽滅菌后，丟棄至醫(yī)療廢物桶,；無菌室以10 mL/m2的甲醛（40%）,，5 g/m2濃度的高錳酸鉀定期封閉消毒[2,3]，若采用甲醛熏蒸,，甲醛氣體必須分布到房間的每個角落。也可以使用普諾賽細胞房安全衛(wèi)士,、水浴鍋安全衛(wèi)士進行定期清理,。
杜絕感染源的產生
實驗人員進入實驗室必須穿隔離衣，盡量減少頻繁出入細胞實驗室,，在操作過程中動作輕柔,，避免微生物氣溶膠的產生。一旦發(fā)現污染,，應立即排查原因,，采取有效可靠的方法清除污染源，盡可能的防止大面積污染,。
控制實驗室濕度與溫度
細菌,、真菌等廣泛存在于自然界中，屬于條件致病菌,，有很強的繁殖能力,，溫暖潮濕的環(huán)境，會大量滋生,。因此,，必須控制實驗室的溫度和濕度，保持室內干燥與清潔,，阻止細菌,、真菌等繁殖，切斷其傳播途徑,。
02
污染的排查
實驗室常見污染有細菌,、真菌、支原體,、黑膠蟲等,。在不確定是否污染的情況下，可進行排查,，初步確定是否污染及污染的類型,。
1
采樣
對懷疑污染的地方,，比如操作臺、培養(yǎng)箱,、顯微鏡等,，用醫(yī)用滅菌級棉簽蘸取采樣液（生理鹽水）進行采樣；對可疑培養(yǎng)試劑,，吸取少量試劑進行取樣,；對懷疑有污染的細胞，吸取培養(yǎng)液上清進行取樣,。
2
培養(yǎng)
將采集的樣本分別置于瓊脂培養(yǎng)基與DMEM培養(yǎng)基中,，瓊脂培養(yǎng)基放于生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，DMEM培養(yǎng)基置于37℃,、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d,。
3
檢測
觀察瓊脂培養(yǎng)基是否出現細菌或者真菌菌落；可選擇使用PCR法,、顯色法或熒光染色法檢測是否有支原體污染,；對于“黑膠蟲"污染，目前沒有明確鑒定方法,。
03
污染后處理
環(huán)境中發(fā)現污染
使用75%的酒精擦拭操作臺/儀器設備,，進行消毒。甲醛（40%）10 mL/m2,，高錳酸鉀5 g/m2,，熏蒸細胞培養(yǎng)室。同時也可使用普諾賽細胞房安全衛(wèi)士,、水浴鍋安全衛(wèi)士進行殺菌消毒,。
細胞中發(fā)現污染
①
輕度細菌污染可用10×雙抗清洗處理，重度細菌污染建議丟棄后消殺,。
②
真菌污染可以嘗試使用兩性霉素B進行處理,，抑制真菌生長。真菌較難根-除,，不建議保留,，建議丟棄后消殺。
③
支原體,、“黑膠蟲"污染后若細胞狀態(tài)尚可,，可添加支原體清除試劑/“黑膠蟲"清除試劑培養(yǎng)2~3代觀察細胞狀態(tài)；若細胞污染后狀態(tài)很差,，建議丟棄后消殺,。
●參考文獻●
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