12月14日的直播中,，普諾賽直播間為大家介紹了細(xì)胞黑點(diǎn)、細(xì)胞狀態(tài)變形,、細(xì)胞空泡,、聚團(tuán)、脫落等常見問題,，直播回放請至B站 -“普諾賽生物"進(jìn)行觀看,。本期直播答疑，從直播間提問中,，篩選出部分有代表性的問題,，做了詳細(xì)解答。如有其他問題,，也歡迎大家在公眾號留言,，我們將在線解答。
消化時間過長會損傷細(xì)胞嗎,？
消化時間過長會導(dǎo)致細(xì)胞膜蛋白的改變,，最直觀的表現(xiàn)就是消化后第二天漂浮細(xì)胞很多或者貼壁慢。
胰酶消化不掉的,，二次消化對細(xì)胞損傷
小還是機(jī)械吹打?qū)?xì)胞損傷小,？
建議二次消化,。細(xì)胞與細(xì)胞間的連接沒有通過酶切開的話，用移液槍進(jìn)行吹散后細(xì)胞會被撕裂,，直接導(dǎo)致細(xì)胞不貼壁甚至死亡,。
懸浮細(xì)胞聚團(tuán)怎么處理？
懸浮細(xì)胞聚團(tuán),，要分情況進(jìn)行處理：
? 原本就是聚團(tuán)生長的細(xì)胞,，不用干預(yù)，比如NK-92等就是聚團(tuán)生長,；
? 如果是非聚團(tuán)生長的細(xì)胞,，比如THP-1聚團(tuán)了，要區(qū)分高密度和低密度,。高密度可以輕輕吹散細(xì)胞后進(jìn)行低速離心,，去除里面夾雜的死細(xì)胞，正常傳代即可改善,；
? 非聚團(tuán)生長的細(xì)胞低密度時,，聚團(tuán)一般是細(xì)胞狀態(tài)不太好，需要調(diào)整狀態(tài),。排查是否有污染以及培養(yǎng)環(huán)境合不合適等問題,，對癥改善后細(xì)胞即可正常生長,，聚團(tuán)改善；
? 剛復(fù)蘇的懸浮細(xì)胞也會出現(xiàn)聚團(tuán),，一般是靜置培養(yǎng)和少動,，期間可以用補(bǔ)液和半換液的方式培養(yǎng)，等細(xì)胞密度長起來,，生長至對數(shù)生長期時,，團(tuán)塊問題也會改善。
培養(yǎng)細(xì)胞系有很多無規(guī)則運(yùn)動的小黑點(diǎn),，
培養(yǎng)基未渾濁,、變黃，細(xì)胞生長速度不
變,，形態(tài)變化不大,。請問這是什么污染？
這個情況比較符合血清沉淀或者細(xì)胞碎片分泌物之類的,，一般不用過于關(guān)注,，細(xì)胞能夠茁壯生長就可以了。
豬肺泡巨噬細(xì)胞做實(shí)驗(yàn),，一般可以傳多
少代以內(nèi),？
如果是豬的肺組織提取的原代巨噬細(xì)胞，一般是終末分化的細(xì)胞,，是不能增殖的，只能轉(zhuǎn)移到孔板做實(shí)驗(yàn),。
要收集細(xì)胞分泌的蛋白時,，培養(yǎng)基中加
不加FBS？應(yīng)該怎么選擇,？
一般要做分泌蛋白都是不建議加血清的,。血清里面可能有一些蛋白類未知成分，不排除會和實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)蛋白有反應(yīng)或者類似,，所以通常都是用的無血清,。
提取的原代細(xì)胞不貼壁，怎么辦,？
原代組織分離后體外培養(yǎng)通常會有類似的問題,，需要選擇合適的包被試劑進(jìn)行輔助貼壁，這是原代提取比較常見的操作,。
如果對細(xì)胞的均勻度要求很高,，有沒有
好的方法可以提高鋪板時細(xì)胞的分布勻度？
首先是細(xì)胞消化后盡量成單顆,，鋪板的時候需要練習(xí)下手法,，不要有旋渦產(chǎn)生,，導(dǎo)致分布不均勻；除開鋪板手法外,，細(xì)胞本身特性導(dǎo)致的容易聚團(tuán)生長,，可以嘗試包被培養(yǎng)瓶以后低密度接種細(xì)胞，可能會達(dá)到比較好的單層貼壁的情況,。
消化時胰酶要預(yù)溫嗎,？水浴鍋預(yù)溫可以嗎,？
胰蛋白酶屬于酶制品,，受溫度影響，反復(fù)的4℃- 37℃的溫度波動反而會導(dǎo)致酶失活,，效果不好,，所以不建議37℃復(fù)溫,。4℃拿出來可以直接用，加入到細(xì)胞消化的時候放進(jìn)培養(yǎng)箱就好了,。
我養(yǎng)的上皮細(xì)胞消化下來有很多像葡萄串
一樣的細(xì)胞團(tuán),，吹打也不能讓細(xì)胞分開。
這種情況一般還是消化不充分導(dǎo)致,，建議可以適當(dāng)延長消化時間,，待細(xì)胞與細(xì)胞間的連接打開后再進(jìn)行吹散，一般是很容易吹散的,。
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