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細胞學(xué)堂 | RAW 264.7誘導(dǎo)極化及鑒定大全

閱讀:2673      發(fā)布時間:2023-2-3
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RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)是破骨細胞,、炎癥研究最-常用的體外模型之一,被廣泛用于研究風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,、骨質(zhì)疏松癥,、骨質(zhì)溶解,、牙周炎等骨骼疾病。


極化方式


巨噬細胞是具有異質(zhì)性的一類免疫細胞,,在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型參與機體生理,、病理反應(yīng)。從激活方式上分為經(jīng)典激活的巨噬細胞M1選擇性激活的巨噬細胞M2,。


1

M1型分化

細菌和脂多糖(LPS)可以誘導(dǎo)巨噬細胞向M1型分化,,產(chǎn)生促炎細胞因子,抵抗病原入侵,,但也會造成機體損傷,,在實驗中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時誘導(dǎo)其極化


640.png

圖1. a.RAW 264.7 未分化形態(tài)圖 b.RAW 264.7 M1型分化形態(tài)圖




2

M2型分化

白細胞介素(IL-4)可以誘導(dǎo)巨噬細胞向M2型分化,,分泌抗炎細胞因子,,并在組織修復(fù)與重建和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用,在實驗中可采用10ng/mL IL-4作用12小時誘導(dǎo)其極化,。


圖2. RAW 264.7 不同分型形態(tài)圖



鑒定方法


M1,、M2具有各自特征性標志分子,iNOS,、CD86,、TNF-α是常見的M1型巨噬細胞的標志分子,IL-10,、Arg-1,、CD206是常見的M2型巨噬細胞標志分子。一般在實驗研究中:

1

WB可以分析RAW264.7細胞iNOS,、YM-1和Arg-1的表達水平(如圖3),;


圖3. WB分析照射對IL-4誘導(dǎo)的RAW264.7細胞YM-1和Arg-1的表達影響

2

流式細胞術(shù)(FCM)可以分析RAW264.7細胞表面CD86和CD206的表達(如圖4);


640 (2).png

圖4. 流式細胞術(shù)分析照射對IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細胞CD206和CD209的表達

3

實時定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β,、IL-6,、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細胞因子的表達及分泌(如圖5),;


640 (3).png

圖5. 用于實時熒光定量PCR的引物序列

4

Griess reagent 可以分析細胞培養(yǎng)上清 NO 生成(如圖6),。


圖6. 不同樣品對RAW 264.7中NO產(chǎn)生的影響


參考文獻


[1] 羅進芳, 朱瑞麗, 易浪,等. 青藤堿對LPS、IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7巨噬細胞極化的影響[J]. 中國免疫學(xué)雜志, 2015, 31(1):5.

[2] 陳濤, 梁瀟, 賀明,等. RAW264.7細胞M1/M2亞型的誘導(dǎo)和鑒定[J]. 中國分子心臟病學(xué)雜志, 2011(2):4.

[3] 解海榮, 李貞, 李海亮 ,等. 不同照射方式對IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細胞極化的影響. 中國輻射衛(wèi)生, 2017, 26(6): 637-641.

[4] Li C, Du Y, Lv H, et al. Injectable Amphipathic Artesunate Prodrug-Hydrogel Microsphere as Gene/Drug Nano-Microplex for Rheumatoid Arthritis Therapy[J]. Adv. Funct. Mater. 2022, 32, 2206261.

[5]  Li P ,  Hao Z ,  Wu J , et al. Comparative Proteomic Analysis of Polarized Human THP-1 and Mouse RAW264.7 Macrophages[J]. Frontiers in Immunology, 2021, 12:700009.

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