分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀都是實(shí)驗(yàn)室常用的兩種儀器,,它們的測(cè)定原理是相同的,都是使用朗伯-比耳定律,,測(cè)定的都是樣本的吸光度,。
酶標(biāo)儀按照功能的不同劃分,可以分為
(1)光吸收酶標(biāo)儀(可見(jiàn)酶標(biāo)儀,紫外/可見(jiàn)酶標(biāo)儀)
(2)熒光酶標(biāo)儀
(3)化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀,。
分光光度計(jì)按照波長(zhǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為:
(1)可見(jiàn)光分光光度計(jì)
(2)紫外分光光度計(jì)
(3)紅外分光光度計(jì)
(4)熒光分光光度計(jì)
(5)原子吸收分光光度計(jì),。
分光光度計(jì)和酶標(biāo)板存在一些不同之處,具體差別體現(xiàn)在以下三個(gè)方面:
(1)盛裝待測(cè)溶液的容器:分光光度計(jì)用的是比色皿,,酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板),。比色皿只能起到盛裝溶液的作用,每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液,。酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成,,對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,因此用它作為固相載體,,酶標(biāo)板通常為48孔或96孔,,每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。
(2)光路的方向:分光光度計(jì)是水平光路,,而酶標(biāo)儀則是垂直光路,。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過(guò),因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過(guò)待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過(guò)比色液,。垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測(cè)樣本液面是否水平,、酶標(biāo)板透光性,、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長(zhǎng)度:由于光密度(OD值)與吸光系數(shù),待測(cè)組分的濃度以及光路長(zhǎng)度成正比關(guān)系,。分光光度計(jì)采用的比色杯的寬度通常是25px,,所以光路長(zhǎng)度固定為25px。因此不同儀器,,不同批次測(cè)量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性,。而酶標(biāo)儀采用的是垂直光路,所以光路的長(zhǎng)度應(yīng)該是液體液面的高度,所以測(cè)得的值受到樣品的體積的影響,。
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