分光光度計是用不連續(xù)的波長采樣反射物體或透射物體的一種測量儀器,。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同，對不同波長光線的吸收能力也不同,，因此,，每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長的混合光中,，將每一種單色光分離出來,，并測量其強度的儀器叫做分光光度計,。
分光光度法是比色法的發(fā)展,。比色法只限于在可見光區(qū),，分光光度法則可以擴展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū),。分光光度法則要求近于真正單色光,，其光譜帶寬最大不超過3-5nm，在紫外區(qū)可到1nm以下,，來自棱鏡或光柵,，具有較高的精度。
分光光度計,？就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器,。分光光度計可分為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計),、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計,。
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項目對分析結(jié)果的影響
1,、波長準(zhǔn)確度
分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個吸收峰的波長,。由于儀器的制造和調(diào)整誤差,，單色光的實際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度,，對波長準(zhǔn)確度要求允許寬些,。但是，當(dāng)吸收峰寬度較小,，而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,，此時波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。
2,、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度
很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。
3、雜散光
雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機械零件表面的漫反射形成的,。雜散光是分析樣品的非吸收光,，隨著樣品濃度的增加,，雜散光的影響也隨之增大,，將給分析結(jié)果帶來一定的誤差,。在紫外的短波區(qū)域光源強度和檢測器的靈敏度均明顯減弱,，雜散光的影響更不能忽視,。因此，雜散光的大小也是儀器性能的一項重要指標(biāo),。
使用與維護
1,、若大幅度改變測試波長，需稍等片刻,，等燈熱平衡后,，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量,。
2,、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上,。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零,。
3,、比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈,，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率,。
4,、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率,。
5、WFZ800-DA,、756型等分光光度計,，由于其光電接收裝置為光電倍增管,，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號,，而不能用來檢測強光,。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降,。針對其上述特點,，在維修,、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預(yù)熱時,，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿,，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn),。
6,、放大器靈敏度換擋后,，必須重新調(diào)零,。
7,、比色杯的配套性問題,。比色杯必須配套使用,，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應(yīng)進行比較,。
具體方法如下：分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液,，把儀器置于某一波長處,，石英比色杯,；220nm、700nm裝蒸餾水,，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水,，將某一個池的透射比值調(diào)至100%,，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用,，若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響,。
典型故障及其排除方法
1、儀器不能調(diào)零,?？赡茉颍?br />
a.光門不能*關(guān)閉。解決方法：修復(fù)光門部件,，使其*關(guān)閉。
b.透過率“100%”旋到底了,。解決方法：重新調(diào)整“100%”旋鈕,。
c.儀器嚴(yán)重受潮。解決方法：可打開光電管暗盒,，用電吹風(fēng)吹上一會兒使其干燥,，并更換干燥劑。
d.電路故障,。解決方法：檢修電路,。
2、儀器不能調(diào)“100%”,。可能原因：
a.光能量不夠,。解決方法：增加靈敏度倍率檔位,，或更換光源燈(盡管燈還亮)。
b.比色皿架未落位,。解決方法：調(diào)整比色皿架使其落位,。
c.光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法：更換部件,。
d.電路故障,。解決方法：調(diào)修電路。
3,、測量過程中,“100%”點經(jīng)常變動?？赡茉颍?br />
a.比色皿在比色皿架中放置的位置不一致,，或其表面有液滴。解決方法：用擦鏡紙擦干凈比色皿表面,，然后將其安放在比色槽的左邊,，上面用定位夾定位,。
b.電路故障(電壓、光電接收,、放大電路)。解決方法：送修,。
4、數(shù)顯不穩(wěn),?？赡茉颍?br />
a.預(yù)熱時間不夠。解決方法：延長預(yù)熱時間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因,，長時間處于工作狀態(tài)時,，也會工作不穩(wěn))。
b.光電管內(nèi)的干燥劑失效,，使微電流放大器受潮,。解決方法：烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑,。
c.環(huán)境振動過大,、光源附近空氣流速大,、外界強光照射等。解決方法：改善工作環(huán)境,。
d.光電管,、電路等其它原因。
小結(jié)
綜上所述,，以下幾個問題應(yīng)引起儀器操作人員注意：
1,、比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問題。
有些使用者對這個問題不夠重視,，因操作不當(dāng)造成偶然誤差,，嚴(yán)重影響分析結(jié)果,。
首先,，應(yīng)保證比色皿不傾斜放置,。稍許傾斜,，就會使參比樣品與待測樣品的吸收光徑長度不一致,，還可能使入射光不能全部通過樣品池,，導(dǎo)致測試比準(zhǔn)確度不符合要求。
其次,，應(yīng)保證每次測試時,，比色皿架推拉到位。若不到位,，將影響到測試值的重復(fù)性或準(zhǔn)確度,。最后,還應(yīng)保證比色皿的清潔度,延長其使用壽命,。
2,、干燥劑的使用問題,。干燥劑失效將導(dǎo)致：
a.數(shù)顯不穩(wěn)、無法調(diào)“0”點或“100%”點(電路或光電管受潮),。
b.反射鏡發(fā)霉或沾污,，影響光效率、雜散光增加,。鑒于上述原因,，分光光度計的放置地點應(yīng)遠(yuǎn)離水池等濕度大的地方、干燥劑應(yīng)定期更換或烘烤,。
3、儀器的工作環(huán)境
應(yīng)避免陽光直射,、避免強電場,、避免與較大功率的電器設(shè)備共電、避開腐蝕性氣體等,。
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