PriCells: 正常大鼠施旺細(xì)胞的培養(yǎng)                                                                              

實驗材料：
1. 生后2d大鼠的坐骨神經(jīng),；
2. 不含Ca²⁺和Mg²⁺的1×PBS，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素,，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶和0.03%膠原酶的混合消化液,；
4. 培養(yǎng)液a：DMEM培養(yǎng)液,，加入0.02—0.025mol/L HEPES，pH7.2,；
5. 培養(yǎng)液b：DMEM,，添加10%FBS；
6. 培養(yǎng)器具：眼科剪,、眼科鑷,、網(wǎng)眼孔徑為60μm的尼龍濾網(wǎng)；

實驗方法：
1. 用70%乙醇消毒動物,，斷頭處死，取坐骨神經(jīng),，放入預(yù)冷的培養(yǎng)液a中,；
2. 將坐骨神經(jīng)移入混合消化液中，在37℃水浴中振蕩消化15min,；
3. 換新鮮消化液,，再次消化15min；
4. 吸去消化液,，用培養(yǎng)液b清洗2次,，再加入新鮮培養(yǎng)液b，然后用吸管反復(fù)吹打,。用孔徑為60μm的尼龍濾網(wǎng),，收集濾液，以2000r/min離心10min,；
5. 吸去上清液,，用培養(yǎng)液b混懸沉淀細(xì)胞，將細(xì)胞種植于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，靜置培養(yǎng)24h,；
6. 加入10-5mol/L阿糖胞苷，繼續(xù)培養(yǎng)48—72h,。當(dāng)細(xì)胞生長形成單層時,，進(jìn)行傳代,；