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PriCells: 非限制性體干細(xì)胞(USSCs)的分離

時(shí)間:2021-11-1 閱讀:191
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PriCells: 非限制性體干細(xì)胞(USSCs)的分離                                           


試劑和材料: 
1. 起始培養(yǎng)基,;
2. 擴(kuò)增培養(yǎng)基;
3. 0.05%胰蛋白酶,,含EDTA,;
4. PBSA;
5. T25培養(yǎng)瓶,;


實(shí)驗(yàn)方法:
1. 制備和分離臍帶血來源的MNCs(CB-MNCs),;
2. 如果使用凍存的CB-MNCs,復(fù)蘇的細(xì)胞可以用于培養(yǎng),,不需要其他分離步驟,;
3. 用起始培養(yǎng)基按5×106 —7×106個(gè)細(xì)胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中;
4. 將細(xì)胞放在37℃,,5%CO2的條件下培養(yǎng),,2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細(xì)胞因子;
5. 形成USSC集落后,,在擴(kuò)增培養(yǎng)基中擴(kuò)增細(xì)胞,;
6. 將細(xì)胞放在37℃,5%CO2的條件下培養(yǎng),;
7. 到達(dá)80%匯合后,,用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化細(xì)胞,并按1:3比例傳代,,在相同培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng),;

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