PriCells: 飼養(yǎng)層細胞共培養(yǎng)體外擴增原代CD34⁺細胞                                            

試劑和材料：
1. MSCs培養(yǎng)基,；
2. 6孔培養(yǎng)板,；
3. 絲lie霉素C,，100μg/ml；
4. 共培養(yǎng)的培養(yǎng)基：IMDM添加10%FBS,，100U/ml青霉素和100μl/ml鏈霉素,；
5. 細胞因子（干細胞因子，IL-6,，F(xiàn)lt-3配體,，促血小板生成素）；

實驗方法：
1. 將臍帶血來源的間充質(zhì)干細胞（CB-MSCs）作為飼養(yǎng)層細胞,，用MSCs培養(yǎng)基重懸CB-MSCs,，細胞濃度為5×10⁴個細胞/ml；
2. 將CB-MNCs接種到6孔板,；
3. 每周兩次半量更換新鮮培養(yǎng)基,；
4. 當(dāng)CB-MNCs達到90%以上匯合時，用10μg/ml絲lie霉素C處理,，37℃ 2.5h,；
5. 用無血清IMDM將CB-MNCs洗兩遍；
6. 按1×10⁴/ml CD34⁺細胞重懸于含細胞因子的共同培養(yǎng)基（100ng/ml干細胞因子,，100ng/ml IL-6,，50ng/ml Flt-3配體，10ng/ml促血小板生成素）,；
7. 將CD34⁺細胞接種到CB-MSCs飼養(yǎng)層細胞上,；
8. 每周兩次更換1/4培養(yǎng)基；
9. 2周后,，收集未貼壁細胞,；