PriCells: 從CB-MNCs中分離CD34+細胞      

試劑和材料：
1. 培養(yǎng)基；
2. 過柱緩沖液：pH7.2的PBSA,，添加0.5%牛血清白蛋白和2mmol/L EDTA或0.6%枸櫞酸葡萄糖A方（ACD-A）,。用真空裝置除去緩沖液中的氣體；
3. FcR阻斷劑,；
4. CD34微球,；
5. 柱子（MS+/RS+或LS+/VS+）；
6. 磁珠細胞分離儀（如MiniMACS）,；
7. 尼龍過濾網(wǎng),，30μm；

實驗方法：
1. 準備過柱緩沖液,，用抽真空裝置去除氣體,；
2. 每108個CB-MNCs用終體積300μl緩沖液重懸,；
3. 每108個CB-MNCs懸液加100μlFcR阻斷劑,，抑制CD34微珠非特異性結合或通過Fc受體介導與非靶細胞的結合；
4. 每108個CB-MNCs懸液加100μlCD34微球進行細胞標記,，充分混勻后在6-12℃冰箱放置30min,；
5. 加PBSA洗，室溫200g離心100min；加適量的緩沖液重選細胞,；
6. 根據(jù)CB-MNCs的細胞總數(shù)選擇合適的柱子類型（MS+/RS+或LS+/VS+）,，將柱子放入MACs分離儀的磁場中，加入緩沖液潤洗柱子（MS+/RS+：500μl,；LS+/VS：3ml）,；
7. 用30μm尼龍過濾網(wǎng)過濾細胞，去除細胞團,。使用前,，用緩沖液濕潤柱子；
8. 將細胞懸液加入柱子,，使未結合的細胞通過柱子,；
9. 用緩沖液將未結合的細胞洗去（MS+/RS+：3×500μl；LS+/VS：3×3ml）,；
10. 洗脫結合的細胞,；
（1） 將柱子從分離儀中移出；
（2） 置于合適的管中,；
（3） 將柱子加滿緩沖液（MS+/RS+：1ml,；LS+/VS：5ml）；
（4） 用柱子隨帶的內塞,，加壓將結合的細胞沖洗出來,；
11. 加PBSA將CD34+細胞洗一遍，室溫200g離心10min,。用適當?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細胞,；