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PriCells: 正常角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells: 正常角膜內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 角膜材料：可以取自人眼,、兔眼或者牛眼,，人眼材料最好來(lái)自胎兒,；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,，pH7.2,；
3. 特殊器械：虹膜恢復(fù)器；
4. 消毒液：1：5000的sheng汞溶液與100IU/ml的慶大霉素生理鹽水,；
5. 消化液：0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA混合溶液,；
6. 培養(yǎng)液：基礎(chǔ)液由DMEM培養(yǎng)基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成,。應(yīng)用液是在基礎(chǔ)液內(nèi)補(bǔ)加15%的胎牛血清,、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml,，并用5% NaHCO3調(diào)節(jié)pH至7.0—7.2,；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 切取角膜內(nèi)皮層組織：以人眼為材料培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞時(shí)，最好取自胎兒的眼角膜,。因?yàn)槌赡耆搜劢悄ぜ?xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),，生長(zhǎng)活力不如胎兒眼角膜細(xì)胞,；
1） 摘取眼球1只，用sheng汞溶液與慶大霉素生理鹽水消毒液交替沖洗2次,，以洗去眼球表面殘留的血污并作初步消毒處理,；
2） 無(wú)菌條件下，于角膜緣內(nèi)側(cè)1mm處作一環(huán)形小切口,；
3） 用虹膜恢復(fù)器從切口處插入后彈力膜與角膜基質(zhì)（實(shí)質(zhì)層）之間,，順角膜弧度鈍性分離去除整個(gè)角膜實(shí)質(zhì)層；
4） 待角膜上皮層被*分離之后,，沿角鞏膜緣內(nèi)側(cè)1mm處環(huán)形剪下全周內(nèi)皮層組織,；
2. 接種與培養(yǎng)；
1） 將所取的內(nèi)皮層組織放在培養(yǎng)皿中,，加入2—3滴牛血清,；
2） 用角膜剪將其剪成約1.5mm×1.5mm大小的組織塊；
3） 用無(wú)齒小鑷子將組織塊內(nèi)皮面朝下平貼接種于培養(yǎng)瓶中,；
4） 在培養(yǎng)箱中靜置20—60min，待植塊牢固黏附后,，再加入足量培養(yǎng)液,；
5） 按常規(guī)方法培養(yǎng)。每周換液2次,；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物；
6. 原代細(xì)胞總RNA,；
7. 原代細(xì)胞總DNA,；