會(huì)員.png)
5
當(dāng)前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術(shù)文章>>PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 骨髓來(lái)源：骨髓材料由健康人提供；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素，pH7.2,；
3. 分離液：密度為1.073g/ml的Percoll溶液,；
4. DMEM-LG培養(yǎng)液：含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)液，補(bǔ)充10%胎牛血清,、青霉素100IU/ml,、鏈霉素100μg/ml；
5. 消化液：為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液,；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 由臨床醫(yī)生抽取健康人骨髓,。加肝素抗凝；
2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的PBS混合,，用吸管吹打分散細(xì)胞,。在室溫下離心（900g，10min）,。棄上清液,；
3. 加入PBS懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度至4×107個(gè)/ml,；
4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液,，再將5ml細(xì)胞懸液鋪于其上。離心（900g,，30min）,；
5. 收集界面上的細(xì)胞，加入DMEM-LG培養(yǎng)液清洗,。離心,，收集細(xì)胞；
6. 用DMEM-LG培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,，計(jì)數(shù)細(xì)胞,，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度；
7. 將細(xì)胞以1.6×105個(gè)/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶中,。在37℃,、5%CO2飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后換液,，以后每3—4d換液1次,；
8. 當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞相互匯合達(dá)到90%的生長(zhǎng)表面時(shí)，用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細(xì)胞,。進(jìn)行繼代培養(yǎng),；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物；
6. 原代細(xì)胞總RNA,；
7. 原代細(xì)胞總DNA,；