5
當前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術文章>>PriCells: 正常人骨間充質干細胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常人骨間充質干細胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常人骨間充質干細胞的培養(yǎng)
實驗材料：
1. 骨髓來源：骨髓材料由健康人提供,；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,，pH7.2,；
3. 分離液：密度為1.073g/ml的Percoll溶液；
4. DMEM-LG培養(yǎng)液：含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)液,，補充10%胎牛血清,、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml,；
5. 消化液：為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液,；
實驗方法：
1. 由臨床醫(yī)生抽取健康人骨髓。加肝素抗凝,；
2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的PBS混合,，用吸管吹打分散細胞。在室溫下離心（900g,，10min）,。棄上清液；
3. 加入PBS懸浮細胞,，調節(jié)細胞密度至4×107個/ml；
4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液,，再將5ml細胞懸液鋪于其上,。離心（900g，30min）,；
5. 收集界面上的細胞,，加入DMEM-LG培養(yǎng)液清洗。離心,，收集細胞,；
6. 用DMEM-LG培養(yǎng)液重新懸浮細胞，計數細胞,，調節(jié)細胞密度,；
7. 將細胞以1.6×105個/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶中。在37℃,、5%CO2飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。48h后換液，以后每3—4d換液1次,；
8. 當培養(yǎng)的細胞相互匯合達到90%的生長表面時,，用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細胞,。進行繼代培養(yǎng)；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養(yǎng)基,；
2. 各種原代細胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒,；
5. 原代細胞總蛋白質抽提物,；
6. 原代細胞總RNA,；
7. 原代細胞總DNA；