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PriCells: 正常大兔骨間充質(zhì)前體細(xì)胞的體外成軟骨培養(yǎng)
PriCells: 正常大兔骨間充質(zhì)前體細(xì)胞的體外成軟骨培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：5月齡兔；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加100IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素,，pH7.2,；
3. *培養(yǎng)基：DMEM培養(yǎng)液,，補(bǔ)充10%胎牛血清,、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml
4. 化學(xué)限定性培養(yǎng)液：基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基,，添加胰島素6.25μg/ml,、轉(zhuǎn)鐵蛋白6.25μg/ml、ya硒酸6.25μg/ml,、亞油酸5.35μg/ml,、牛血清白蛋白1.25μg/ml、丙酮酸鹽1mmol/L,、抗壞血酸-2-磷酸鹽37.5μg/ml,、地塞米松10-7mol/L、TGF-β1 10ng/ml,。另加青霉素100IU/ml,、鏈霉素100μg/ml；
5. 離心管：15ml聚丙烯圓錐形離心管,；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 在注射器中預(yù)先吸入3000U肝素,，然后從兔髂骨嵴或脛骨抽吸7—8ml骨髓；
2. 將*培養(yǎng)液加入取得的骨髓中,，吹打分散細(xì)胞,。計(jì)數(shù)有核細(xì)胞；
3. 在直徑為10mm的培養(yǎng)皿中接種2×107個(gè)有核細(xì)胞,。于37℃,、5%CO2飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)物用*培養(yǎng)液維持生長(zhǎng)14d,。每隔4d換液1次,；
4. 培養(yǎng)至14d，用胰蛋白酶消化培養(yǎng)物,，分散細(xì)胞,。用*培養(yǎng)液終止胰蛋白酶的作用，收集細(xì)胞,。計(jì)數(shù),；
5. 以每份5×105個(gè)細(xì)胞加到15ml聚丙烯圓錐形離心管中。離心（500g,，10min）,。棄上清液。注意不要分散細(xì)胞團(tuán)塊,；
6. 往離心管小心加入化學(xué)限定性培養(yǎng)液,，保持細(xì)胞團(tuán)塊結(jié)構(gòu),。直接將離心管放到37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。每隔2—3d換液,；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒,；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物,；
6. 原代細(xì)胞總RNA,；
7. 原代細(xì)胞總DNA；