PriCells: 正常大兔主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)

實驗材料：

1. 正常大兔主動脈,；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素，pH7.2,；

3. 培養(yǎng)用液：M199培養(yǎng)液（含20%小牛血清）,；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1，V：V）混合消化液,；D-Hanks液,、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；

4. 培養(yǎng)器具：培養(yǎng)瓶或皿,、白內(nèi)障,、眼科剪、鑷子等,；

培養(yǎng)方法：

1． 將動物主動脈取出后,，用絲線結(jié)扎血管一端，然后用探針頂住該端,，將整條血管翻轉(zhuǎn),，使內(nèi)膜翻在外面。將另一端翻折入腔內(nèi)0.5cm并用絲線扎緊,，以防外膜外露及避免酶液進(jìn)入外膜腔內(nèi),；

2． 用D-Hanks液清洗干凈外翻的內(nèi)膜面，將血管浸泡在含0.1%膠原酶溶液的小瓶內(nèi),。蓋上瓶蓋,，在37℃水浴中輕輕搖蕩消化，使內(nèi)皮細(xì)胞離散下來,。消化15—20min后,，見酶液稍有渾濁，即加入等量的含20%小牛血清的M199培養(yǎng)液,，以終止酶的作用。離心（1500r/min,5min）后,，棄上清液,，用20%小牛血清M199培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞；

3． 接種到培養(yǎng)器皿內(nèi),，入37℃,、含5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞長滿瓶皿的生長表面即可傳代,；

4． PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；

5． PriCells-原代內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；

6． PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒；

7． PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；