PriCells: 正常人組織源性鼻咽上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 一般來(lái)自鼻咽癌活檢組織或引產(chǎn)胚胎的鼻咽組織；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素,，pH7.2；

3. 培養(yǎng)基：可使用ROMI1640培養(yǎng)液,，添加20%胎牛血清,、5μg/ml胰島素、2.7×10-7 mol/L氫化可de松,。也可用DMEM培養(yǎng)液,；

4. 低血清培養(yǎng)液與無(wú)血清培養(yǎng)液：基礎(chǔ)培養(yǎng)液均為DMEM/F12（1:1，V/V）混合液,。配置時(shí),，添加1.2g/L NaHCO3及15 mmol/L HEPES。低血清培養(yǎng)液是在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中再加入5μg/ml胰島素,、5ng/ml表皮生長(zhǎng)因子,、0.3mg/ml谷氨酰胺、100 IU/ml青霉素,、100μg/ml鏈霉素,、5×10-7 mol/L氫化可de松以及1.25%胎牛血清。若去掉低血清培養(yǎng)液中的胎牛血清,，再加1mg/ml牛血清白蛋白及10μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白,，即為無(wú)血清培養(yǎng)液；

5. 消化液：0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶溶液,，用D-Hanks液配制,；

實(shí)驗(yàn)方法：

1. 取胚齡4—6個(gè)月水囊引產(chǎn)的胚胎,，在無(wú)菌條件下分離鼻咽粘膜。若取材于鼻咽癌活檢組織,，則須將組織置于含高濃度抗生素（青霉素500 IU/ml,、鏈霉素500μg/ml）的Hanks液中，在4℃下處理1小時(shí),；

2. 用Hanks液（含青霉素100 IU/ml,、鏈霉素100μg/ml）漂洗2次，除去血kuai,；

3. 將所取材料剪成0.5—1mm3的碎片,，再用Hanks液充分漂洗；

4. 將植塊種植到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)作干貼壁,。翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，在瓶中加入2mlRPMI 1640培養(yǎng)液，在37℃培養(yǎng)箱中靜置數(shù)小時(shí),；

5. 待植塊牢固貼壁后,，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使培養(yǎng)液均勻覆蓋住植塊,。在37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)； 培養(yǎng)24小時(shí)后換液,，去除未貼壁細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng),，以后每周換液2—3次；

6. 3天后,，去除未貼壁的植塊,。每3天換半量培養(yǎng)液；

7. PriCells-原代上皮細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；

8. PriCells-原代上皮細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑,；

9. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒；

10. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒,；