PriCells: 正常大鼠皮膚肥大細(xì)胞的培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)材料：

1. 正常大鼠（體重150g—250g）的皮膚；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,，添加200000IU/L青霉素,、200mg/L鏈霉素,，pH7.2；

3. 消化液：1g/L膠原酶和1g/L透明質(zhì)酸酶（1:1,，v/v）混合消化液,，用含10mmol/L HEPES和20%FBS的HBSS配制；

4. 沖洗液：改良的Tyrode液,，含137mmol/L NaCl、2.7 mmol/L KCl,、0.36 mmol/L NaH2PO4,、5.55 mmol/L 葡萄糖,、10 mmol/L HEPES、1 mmol/L CaCl2和1 mmol/L MgCl2,；

5. 培養(yǎng)液：ROMI1640,，添加10%FBS,、25 mmol/L 谷氨酰胺、25 mmol/L HEPES,、100000 IU/L青霉素和100mg/L慶大霉素,。pH7.2；

6. 手術(shù)刀,、解剖剪、解剖鑷,、眼科剪,，眼科鑷，止血鉗,；

7. 離心管（15ml、50ml）

8. 網(wǎng)篩：0.75mm不銹鋼濾網(wǎng)

實(shí)驗(yàn)方法：

1. yi醚麻醉后,，放血處死動物,。剃去腹部毛，用70%乙醇消毒,。切開皮膚,，剝?nèi)〖s3cm×4cm皮片,。將皮片放入培養(yǎng)皿內(nèi)，用沖洗液清洗3次,；

2. 用刀片將皮片垂直切成約1mm2小片,，放入三角瓶中，然后加入20—25ml消化液,，在培養(yǎng)箱內(nèi)靜止消化4h。將三角瓶移入恒溫水浴振蕩器內(nèi),，37℃水浴中振蕩消化45min;

3. 用吸管充分吹打組織塊,，再用孔徑為0.75mm的不銹鋼濾網(wǎng)濾出組織塊。收集濾液,，在4℃條件下離心（150g,，5min）。吸去上清液,，用預(yù)冷的沖洗液混懸沉淀細(xì)胞，離心（150g,，5min）,。用培養(yǎng)液混懸細(xì)胞,，調(diào)整細(xì)胞密度，使混合細(xì)胞中肥大細(xì)胞達(dá)到2×105個(gè)/ml,。培養(yǎng)12h,；

4. 輕輕搖晃培養(yǎng)皿，收集含有肥大細(xì)胞的培養(yǎng)液,。然后，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)皿中置于37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng),；

5. PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

6. PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

7. PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒