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PriCells: 原代細(xì)胞復(fù)蘇的基本操作方法
PriCells: 原代細(xì)胞復(fù)蘇的基本操作方法
一,、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
（1）儀器：凈化工作臺(tái),、離心機(jī)、恒溫水浴箱,、倒置相差顯微鏡,、培養(yǎng)箱、液氮冰箱
（2）玻璃器皿：吸管（彎頭,、直頭）,、培養(yǎng)瓶、玻璃瓶（250ml,、100ml）,、廢液缸
（3）塑料器皿：吸頭、槍頭,、膠塞,、移液管（10ml）、15ml離心管,、凍存管（1～2ml）
（4）其他物品：微量加樣槍,、紅血球計(jì)數(shù)板、記號(hào)筆,、醫(yī)用橡皮膏,、移液槍
（5）試劑：PBS、小牛血清,、培養(yǎng)液,、雙抗（青霉素、鏈霉素）,、胰蛋白酶（0.08%）
二,、操作步驟
（1）從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃溫水中,，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。
（2）從37℃水浴中取出凍存管，75％酒精消毒后,，打開(kāi)蓋子,，用吸管吸出細(xì)胞懸液,，加到離心管中,。PriCells推薦接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。
（3）離心,，1000rpm，5min,。PriCells推薦不離心,。
（4）棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，計(jì)數(shù),，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。PriCells推薦小牛血清濃度依據(jù)原代細(xì)胞種類。
（5）次日更換一次1／2培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng),。
三、注意事項(xiàng)
（1）將凍存管從液氮容器中取出時(shí),，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷。
（2）取出凍存管后立即放入水浴中,，使其盡快融化（在1－2分鐘內(nèi)）,。
（3）復(fù)蘇最好用新配制的培養(yǎng)液。