PriCells:
原代肺泡上皮細胞(Primary Alveolar Epithelial Cells)的體外分離培養(yǎng)
1、*無血液殘留肺臟組織:
2,、消化肺組織:
常用細胞消化酶:胰蛋白酶、彈性蛋白酶,、膠原酶,。
經(jīng)支氣管將酶灌注到完整的肺中消化,或把肺組織剪碎放入消化液中消化,。前者比后者更有效。
3,、分離純化細胞:
原代肺泡上皮細胞的分離純化主要方法:
(1)密度梯度離心法:
密度梯度離心分離細胞的原理是不同細胞的沉降系數(shù)不同,,在密度梯度離心中細胞所處的位置也相應不同。 用ficoll或percoll不連續(xù)梯度離心法分離肺泡Ⅱ型上皮細胞,。
(2)濾膜分離法:
肺泡Ⅱ型上皮細胞約10mm,,比巨噬細胞(約25mm)和Ⅰ型細胞 (50mm-100mm)小,用150mm孔徑的濾膜初濾除去大的組織碎片,,30mm-40mm孔徑的濾膜除去全部Ⅱ型細胞和部分巨噬細胞,,采用 15mm的濾膜精濾。用濾膜分離操作簡單,,它和其他分離方法聯(lián)合使用可以提高純度,。
(3)流式細胞技術(shù)法:
根據(jù)不同細胞之間的熒光差異,用熒光物質(zhì)標記篩選,。肺泡上皮細胞內(nèi)含有豐富的脂類物質(zhì),,用親脂性熒光素標記,可以得到純度很高的細胞,。流式技術(shù)分離細胞的產(chǎn)量很低,,但純度*。這種技術(shù)經(jīng)過完善在將來會更有吸引力。
(4)免疫黏附法:
用IgG包被培養(yǎng)板,,把肺泡上皮細胞懸液置于板上,,巨噬細胞和其他大多數(shù)非肺泡上皮細胞因為含有Fc片段的受體而與IgG結(jié)合,吸附到板上,,不黏附的肺泡上皮細胞被沖洗下來,,簡便易行,可除去絕大多數(shù)的巨噬細胞,,有效的提高肺泡上皮細胞純度,。
(5)貼壁選擇法:
貼壁選擇原理:肺泡上皮細胞完成貼壁的時間不同,這種特性用肺泡上皮細胞培養(yǎng)時做篩選,。
總之,,根據(jù)肺泡上皮細胞培養(yǎng)最終目的,綜合幾種方法能達到預期效果,。
例如:(1)先用濾膜過濾,;(2)再用IgG包被法。
4,、PriCells的產(chǎn)品
(1) 原代肺泡上皮細胞,, 5×105 細胞數(shù)/1ml
(2) 原代細胞分離試劑盒
(3) 原代細胞分離鑒定盒
(4) 原代上皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
(5) 原代上皮細胞培養(yǎng)特制添加劑