5
腫瘤組織源性的原代細胞培養(yǎng)
概述
腫瘤細胞的原代培養(yǎng)與正常細胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似,。一般常用原代細胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，10%血清濃度即可,，在原代培養(yǎng)時需加入原代細胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長,。用細胞生長因子如胰島素,、氫化可de松、雌激素等等,。也可以考慮動物媒介培養(yǎng),。，根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子,。腫瘤組織分離為腫瘤細胞原代培養(yǎng)的方法主要有組織塊法,、酶消化法、鉭網(wǎng)法,、脫落細胞法等,。
1.組織塊法
將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分,，在平皿中用Hanks液洗3次,，剪碎組織，切成1-2mm3小塊,，接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中,，37℃、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng),。
2.酶消化法
在剪碎組織，切成1-2mm3小塊中,，加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶,，在37℃水浴中消化30min或更長一些，去除消化液,，用洗液洗3次,，培養(yǎng)基洗1次后，用*培養(yǎng)基懸浮,，并用吸管吹打分散制成細胞懸液,，計數(shù)。以（5-10）x108個/L細胞濃度,，在含有10%小牛血清的RPMI,、EagleMEM或DMEM中，在37℃,、5%CO2下分瓶（或皿）中培養(yǎng),。
3.鉭網(wǎng)法
在一張面積約為1cm2的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1-2mm3大?。描囎虞p壓,，使其粘于網(wǎng)上,，再把鉭網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中，使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸,，于37℃,、5%CO2下培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次,，5天后可見有上皮細胞從網(wǎng)上移出,，并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細胞。
4.脫落細胞法
將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結(jié)締組織,，洗液洗2次后,，用刀片將腫瘤組織切成細薄片，在切割的同時有許多上皮細胞脫落下來,，脫落細胞經(jīng)洗滌后,，加入*培養(yǎng)基，便可獲得較純的上層細胞,，于培養(yǎng)瓶（或皿）中,，37℃、5%CO2下培養(yǎng),，每隔2-3天換液一次,，7-10天上皮細胞逐漸長成單層。