常溫細胞收貨當天處理方式 1.收到常溫細胞后,及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象,。
2.鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象,,拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象,,方便后續(xù)售后處理。
3.用 75%酒精擦拭瓶身,,置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4h 后進行傳代操作,。
4.觀察細胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代,請根據實際情況決定),,傳代推薦比例 1:2 到 1:3(按實際收貨細胞密度決定,,若不確定可聯(lián)系技術支持);若細胞密度不到 80%則可取出部分培養(yǎng)基留 6ml 左右原瓶培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng),,注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋,;懸浮細胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細胞。
5.由于氣溫,,運輸?shù)扔绊懺斐少N壁細胞漂浮的,,請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代(參考附件),或及時聯(lián)系技術支持進行指導傳代,。
6.若觀察到異?;蛘邔毎幸蓡枺埣皶r跟代理商或者我們聯(lián)系,;對于細胞培養(yǎng)操 作及培養(yǎng)注意事項有疑問的,,可跟我們的技術支持交流。
附:收到貼壁細胞漂浮處理方法(部分細胞由于貼壁松散,,會出現(xiàn)運輸后漂浮,,冬天氣溫低時也會出現(xiàn)細胞收縮漂浮,屬于不可避免因素,,正確處理后都可以正常生長)
1,、將培養(yǎng)瓶內所有培養(yǎng)基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm 3min)去除 舊培養(yǎng)基,;
2,、用 PBS 重懸細胞,將所有細胞收集到一個離心管中,,再次離心(1200rpm 3min)去除 PBS,;
3、加入 1ml 左右 0.25%重懸細胞,,混勻即可,,不能吹打太多次,放入培養(yǎng)箱消化細胞,,根據細胞特性決定消化時間(TM3,、TM4、293 系列約 1~2 分 鐘),;
4,、消化好后,,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,,迅速加入 3-5ml 含 血清的培 養(yǎng)基混勻以終止消化,,離心(1200rpm 3min)去除;
5,、加入 5ml 左右的細胞相應的培養(yǎng)基混勻,,按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中;
6,、顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞,,若有 3-5 個成團的小細胞團可不用重新消化,使之貼壁后待細胞生長穩(wěn)定后再消散細胞,。