免疫分析法是基于抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應(yīng)而建立起來的一種生物化學(xué)分析法，即根據(jù)抗原-抗體反應(yīng),，采用特異性抗體來檢測(cè)藥物、激素,、蛋白質(zhì),、微生物等物質(zhì)的定量分析方法。免疫分析法主要包括酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),、放射性免疫法,、熒光免疫法等，具有方便,、快速的特點(diǎn),，但也存在一定的缺點(diǎn)，如費(fèi)用較高,、毒素之間的交叉反應(yīng)難避免,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性較差等,。

ELISA是檢測(cè)海洋生物毒素所采用的主要免疫方法。該技術(shù)可用目測(cè),，也可用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值,，具有易定性定量的優(yōu)點(diǎn)[6]。Tsao等[7]采用單克隆抗體ELISA檢測(cè)法檢測(cè)ASP中的軟骨藻酸(domoic acid, DA),，并建立了基于單克隆抗體的膠體金免疫條檢測(cè)法,；該方法的檢測(cè)限為5 ng/mL，在10 min內(nèi)就可完成測(cè)定,，提示免疫條檢測(cè)可用來快速檢測(cè)貝類樣品中的DA,。

也有研究者建立了基于基因工程單鏈抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法，該方法最大的優(yōu)勢(shì)是毒素可在大腸桿菌中快速,、大量得到表達(dá),，且容易和其他小分子融合，形成融合蛋白以用于檢測(cè)或其他用途,；對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),，其與標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography, HPLC)檢測(cè)結(jié)果有較好的相關(guān)性[8]。李軍濤等[9]建立DSP免疫熒光層析試紙條檢測(cè)方法,，靈敏度可達(dá)0.125 μg/mL,，達(dá)到我國(guó)貝類產(chǎn)品中DSP所允許的*。

Dubois等[10]建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)STX,，該方法用毒素的偶聯(lián)物免疫產(chǎn)生的抗體來檢測(cè)貽貝,、牡蠣和扇貝中的STX類毒素；在檢測(cè)之前,，用90%的乙醇溶液將STX類毒素從貝類組織里快速提取出來,，該方法的*檢測(cè)限為5 μg/kg。Garthwaite等[11]也建立了4類貝毒的ELISA方法,，均可滿足貝類提取物中樣品的鑒定,，且樣品回收率較高。TTX為氨基全氫喹唑啉型化合物,，是自然界中所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的神經(jīng)毒素之一[12],。

Thattiyaphong等[13]建立了一種側(cè)流免疫層析技術(shù)來實(shí)現(xiàn)TTX的快速檢測(cè)，并運(yùn)用該方法檢測(cè)了河鲀及食用魚中TTX的含量,；與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,，LC-MS/MS)相比，該方法的靈敏度為94.0%,，特異性為92.4%,。

總的來說，側(cè)流免疫層析技術(shù)可用于大批量樣本的篩選，陽(yáng)性結(jié)果的樣本再使用LC-MS/MS進(jìn)行確認(rèn),，減少了LC-MS/MS的測(cè)試量,，降低了檢測(cè)成本。Reverte等[14]開發(fā)了一種基于雙硫醇自組裝單分子膜的新ELISA方法,，該方法可用于檢測(cè)河鲀中TTX的含量,，檢測(cè)限為0.23 mg/kg，其與LC-MS/MS法的相關(guān)性為0.991,。

大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)是DSP中的主要成分,，屬于聚醚類海洋生物毒素，尚無致死病例,，但長(zhǎng)期攝入可以致畸及致癌[15],。劉仁沿等[16]通過細(xì)胞融合，制備抗OA單克隆抗體和膠體金標(biāo)記抗體,，建立快速檢測(cè)OA的免疫層析試紙條分析方法,，該方法檢出限為500 ng/mL。

該研究組在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn),，使用卵清蛋白合成高耦聯(lián)比的包被抗原,，以硝酸纖維素膜為載體，改進(jìn)后方法檢測(cè)限達(dá)12 ng/mL[17],。張洋等[18]采用自行研發(fā)的免疫膠體金試紙條對(duì)雙貝殼類DSP的主要成分OA的污染情況進(jìn)行調(diào)查,，通過與ELISA檢測(cè)法的結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠,，未出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,。Johnson等[19]對(duì)4種已經(jīng)商業(yè)化的快速檢測(cè)試劑盒是否可檢測(cè)英國(guó)雙殼貝類中的DSP進(jìn)行驗(yàn)證。

這4種試劑盒包括1種ELISA試劑盒,、1種蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,，PP2A)試劑盒以及2種側(cè)流免疫測(cè)定(lateral flow immunoassay, LFI)試劑盒。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,，ELISA與LC-MS/MS具有較好的相關(guān)性,，且不存在結(jié)果偏大的情況，但是存在假陰性結(jié)果,；2種LFI試劑盒與LC-MS/MS檢測(cè)結(jié)果大部分具有一致性,，但存在假陰性結(jié)果?？偟膩碚f，選擇何種方法去檢測(cè)DSP主要取決于檢測(cè)要求,、實(shí)驗(yàn)室的條件,、實(shí)驗(yàn)人員是否經(jīng)過訓(xùn)練以及對(duì)結(jié)果的要求是半定量的還是定性的。