血清中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),，包括各種蛋白、多肽,、脂肪,、碳水化合物、生長因子,、激素,、無機(jī)物等，其中一些物質(zhì)在特定的條件下容易形成沉淀,。無論血清產(chǎn)地,、品質(zhì)如何，血清凍融后產(chǎn)生沉淀是無法避免的,，因此各類血清以及含有血清的產(chǎn)品都可能會產(chǎn)生沉淀,。
血清沉淀類型
血清中的沉淀主要為兩類：
一類是絮狀沉淀，這是血清中的纖維蛋白原在解凍過程中轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而形成的,，絮狀物較大時(shí)肉眼可見,。
▲ 纖維蛋白絮狀沉淀
一類是白色顆粒樣沉淀，主要是血清中的磷酸鈣的析出,。也有部分脂蛋白,、膽固醇,、冷凝集素、玻連蛋白,、胎球蛋白等一些脂質(zhì)或蛋白質(zhì)析出,。在顯微鏡下可呈現(xiàn)為黑點(diǎn)樣物質(zhì)，有時(shí)會隨著液體晃動,，因此常常與細(xì)胞碎片或細(xì)菌污染混淆,。
如何去除血清沉淀
通過2000rpm 5min離心，取上清,，即可去除大部分沉淀,。但由于部分沉淀細(xì)小且在使用過程中可能繼續(xù)產(chǎn)生析出沉淀現(xiàn)象，因此很難wan全清除血清內(nèi)的沉淀,。
不建議過濾去除沉淀,，因?yàn)槌恋頃芸於伦V膜導(dǎo)致過濾效果下降。
如何減少血清沉淀產(chǎn)生
血清出現(xiàn)沉淀是和血清的品質(zhì)沒有必然關(guān)系,，并不會影響細(xì)胞生長,。然而過多的沉淀可能會妨礙實(shí)驗(yàn)者對細(xì)胞的觀察，有時(shí)難以和微生物污染區(qū)分,，影響實(shí)驗(yàn)者對細(xì)胞狀態(tài)的判斷,。
那么如何避免血清產(chǎn)生過多沉淀呢,？造成沉淀過多產(chǎn)生的主要原因有熱滅活,、長時(shí)37℃或室溫放置，反復(fù)凍融等,。因此為了避免沉淀過多,，應(yīng)當(dāng)正確使用和保存血清：
l 冰凍的血清使用前放2-8℃冰箱過夜融化
l 室溫或水浴融化將會加速沉淀的產(chǎn)生
l 融化后上下顛倒混勻，不要劇烈搖晃
l 解凍后盡快使用完
l 非必須不滅活
l 不要反復(fù)凍融
如何區(qū)分血清沉淀和污染
纖維蛋白絮狀沉淀有時(shí)會被誤認(rèn)為霉菌,。鏡下觀察,，纖維蛋白沉淀呈現(xiàn)透明絮狀，形態(tài)無規(guī)則,。而霉菌形態(tài)較規(guī)則,，有明顯的菌絲。二者還是比較容易分辨的,。
▲ 左圖：血清沉淀 右圖：霉菌
磷酸鈣沉淀在鏡下為小黑點(diǎn),，常與細(xì)菌混淆。細(xì)菌通常會在1-2天內(nèi)迅速增殖,，導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁,。而磷酸鈣沉淀在37℃會緩慢析出。將血清取樣空培養(yǎng)時(shí),，可以明顯看到黑色顆粒且可能隨培養(yǎng)時(shí)間增加而增多,，該現(xiàn)象為高溫下析出增多現(xiàn)象并非污染，因此不建議采用空培養(yǎng)作為血清檢菌的方式。
若您確實(shí)對血清產(chǎn)品有污染疑慮,，建議取少量血清涂布LB平板進(jìn)行檢菌,。
總之，了解血清中沉淀物的類型和正確的處理方法是非常重要的,。通過合理的處理和預(yù)防措施,，可以有效地減少血清沉淀。
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