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動物細(xì)胞分離培養(yǎng)準(zhǔn)備工作

閱讀:1586      發(fā)布時間:2022-8-19
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動物細(xì)胞分離培養(yǎng)是用無菌操作的方法將動物體內(nèi)的組織(或器官)取出,模擬動物體內(nèi)的生理條件,,在體外進行培養(yǎng),,人們借以觀察細(xì)胞的生長、增殖和細(xì)胞分化以及細(xì)胞凋亡或死亡的過程,。因為分離的細(xì)胞沒有免疫防御系統(tǒng),,所以動物細(xì)胞分離操作需要比外科手術(shù)更加嚴(yán)格的無菌操作,無菌操作的原則就是保證細(xì)胞分離過程中的操作環(huán)境,,使用的器械,、耗材以及試劑無菌。


硬/件/準(zhǔn)/備




01

儀器:超凈工作臺,、離心機、倒置顯微鏡,、培養(yǎng)箱,、冰箱、高壓蒸汽消毒裝置,、移液器,。

02

器械:止血鉗、手術(shù)刀,、眼科剪、手術(shù)剪,、鑷子,、細(xì)胞過濾篩等。所有器械清洗完以后,,使用棉布包裹,,捆好后濕熱滅菌。

03

耗材:培養(yǎng)皿,、培養(yǎng)瓶,、離心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管),、移液管,、燒杯。如果購買的是無菌包裝的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材質(zhì)的用品,,建議使用高壓蒸汽滅菌,。

04

試劑:75%的酒精和碘酒、0.9%的生理鹽水,、DBSS,、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液體培養(yǎng)基,、抗血凝劑,、血清、二甲基亞砜(DMSO),。所使用的液體溶劑大部分使用過濾除菌的方式保證無菌,。培養(yǎng)基在使用前先在37℃水浴中升溫。酶儲液放置于-20 ℃,,稀釋以后放在4℃中保存,,因胰蛋白酶在37℃中降解比較快,所以不建議酶升溫至37℃再使用,,可以直接從4℃中取出用完后盡快放回冰箱,。因為動物組織比較珍貴,建議試劑在使用前先測試是否染菌,。

05

其他:冰塊,、脫脂棉球、封口膜,、記號筆,。




實/驗/室/的/清/潔

實驗室一般采用照射或者熏蒸的方法消毒。熏蒸常使用過氧乙酸蒸氣進行熏蒸,,再通過使用紫外照射的方法滅菌,。實驗室在使用前半個小時打開紫外燈照射,雖然照射也可以對操作桌面滅菌,,但因為紫外線容易被桌面上放置的物品擋住,,導(dǎo)致桌面的滅菌受到影響,所以如有需要可以在使用前先用自來水拖地,、擦桌子,、超凈工作臺等,然后用3%來蘇爾或0.1%新潔爾滅或0.5%過氧乙酸擦拭,。紫外照射的時候也可以預(yù)先將實驗中用到的物品放到實驗臺的邊緣,,進一步降低實驗中可能存在的污染風(fēng)險,照射前檢查實驗中所需要的物品是否已經(jīng)準(zhǔn)備妥當(dāng)(如檢查酒精燈中的酒精量是否可以保證實驗的完成),,避免實驗進行中因為缺少試劑或器械而導(dǎo)致實驗被迫終止,。


實驗人員無菌操作前需要用肥皂清洗雙手及手臂,,用清水沖干凈,穿好滅菌工作服,,戴好口罩和帽子,,進行操作前用75%的酒精擦洗雙手,如戴乳膠手套,,乳膠手套也要擦拭75%的酒精,。可以將消毒用的酒精裝到一個噴壺里面,,這樣保證酒精噴灑均勻,;也可以將脫脂棉球放到裝有酒精的廣口瓶中,使用時用鑷子取出棉球擦拭手和乳膠手套,。

在超凈臺里面進行無菌操作時,,所使用的試劑和器材在使用前應(yīng)用火焰灼燒,如培養(yǎng)瓶的打開和擰緊的操作,,一般使用酒精燈火焰灼燒,。一般使用的金屬器械不能進行長時間灼燒,避免損傷器械,,導(dǎo)致生銹,;金屬器械要等到冷卻以后再取動物組織。吸取過培養(yǎng)基和血清的耗材不能在火焰上加熱太長時間,,避免其中的蛋白等物質(zhì)受熱產(chǎn)生有害物質(zhì),,從而影響細(xì)胞的生長。

產(chǎn)/品/推/薦






無菌,、活性,、高效

【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸鹽緩沖液 1x

【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)

【SNM-002E】DMEM高糖*培養(yǎng)基(含10%血清,雙抗)




公司簡介


武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城,,專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā),、生產(chǎn)和服務(wù),公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實驗室,、動物房,,已整體通過ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證,獲得企業(yè),、3551人才,、瞪羚企業(yè),、科技小巨人等多項榮譽,。  


公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系,、原代細(xì)胞,、胎牛血清,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、*培養(yǎng)基,、輔助試劑等系列產(chǎn)品,,提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購;細(xì)胞庫凍存細(xì)胞系500余種,,同時通過不間斷引種細(xì)胞擴大豐富細(xì)胞種類,;公司還提供人源細(xì)胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等,?! ?/span>


公司細(xì)胞業(yè)務(wù)覆蓋國內(nèi)各大高校生物實驗室、生物研究機構(gòu)及一些生物科研,、診斷,、制藥公司,不斷為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),!尚恩生物—您專業(yè)的細(xì)胞供應(yīng)商,!





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