動物細(xì)胞分離培養(yǎng)是用無菌操作的方法將動物體內(nèi)的組織(或器官)取出,模擬動物體內(nèi)的生理條件,,在體外進行培養(yǎng),,人們借以觀察細(xì)胞的生長、增殖和細(xì)胞分化以及細(xì)胞凋亡或死亡的過程,。因為分離的細(xì)胞沒有免疫防御系統(tǒng),,所以動物細(xì)胞分離操作需要比外科手術(shù)更加嚴(yán)格的無菌操作,無菌操作的原則就是保證細(xì)胞分離過程中的操作環(huán)境,,使用的器械,、耗材以及試劑無菌。
01
儀器:超凈工作臺,、離心機、倒置顯微鏡,、培養(yǎng)箱,、冰箱、高壓蒸汽消毒裝置,、移液器,。
02
器械:止血鉗、手術(shù)刀,、眼科剪、手術(shù)剪,、鑷子,、細(xì)胞過濾篩等。所有器械清洗完以后,,使用棉布包裹,,捆好后濕熱滅菌。
03
耗材:培養(yǎng)皿,、培養(yǎng)瓶,、離心管(15 mL和50 mL)、巴氏吸管(或玻璃吸管),、移液管,、燒杯。如果購買的是無菌包裝的一次性耗材可以直接使用,如果是玻璃材質(zhì)的用品,,建議使用高壓蒸汽滅菌,。
04
試劑:75%的酒精和碘酒、0.9%的生理鹽水,、DBSS,、胰蛋白酶、 DMEM(或PRMI-1640液體培養(yǎng)基,、抗血凝劑,、血清、二甲基亞砜(DMSO),。所使用的液體溶劑大部分使用過濾除菌的方式保證無菌,。培養(yǎng)基在使用前先在37℃水浴中升溫。酶儲液放置于-20 ℃,,稀釋以后放在4℃中保存,,因胰蛋白酶在37℃中降解比較快,所以不建議酶升溫至37℃再使用,,可以直接從4℃中取出用完后盡快放回冰箱,。因為動物組織比較珍貴,建議試劑在使用前先測試是否染菌,。
05
其他:冰塊,、脫脂棉球、封口膜,、記號筆,。
實/驗/室/的/清/潔
【SNB-001】PBS(Phosphate Buffer Saline) 磷酸鹽緩沖液 1x
【SNT-002】0.25%胰酶(含EDTA)
【SNM-002E】DMEM高糖*培養(yǎng)基(含10%血清,雙抗)
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