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人非小細胞肺癌細胞通過去泛素化和穩(wěn)定KLF4抑制非小細胞肺癌

閱讀:1621      發(fā)布時間:2022-8-12
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今天我們來看看一篇關(guān)于非小細胞肺癌的文獻,,首先還是了解下背景,。









肺癌是世界上普遍認為的死亡率最高的癌癥,沒有之一,。肺癌中約有85%是非小細胞肺癌(NSCLC),。據(jù)報道,早期肺癌患者5年存活率為70%,,晚期患者5年存活率不高于20%,。在如此高死亡率的情況下,找到新的靶標分子對探索NSCLC治療有非凡意義,。


之前的研究發(fā)現(xiàn),泛素化涉及包括癌癥在內(nèi)的多種疾病,,被認為是潛在的治療靶點,。OTUD1作為泛素酶的一員,是由481個氨基酸組成的,,與影響諸多分子的各種生理功能有關(guān),。在乳腺癌、胰管腺癌,、甲狀腺癌等均有相關(guān)研究證實其作用,,還有研究發(fā)現(xiàn)OTUD1與改善NSCLC患者的預后有關(guān),然而目前尚不清楚是如何影響NSCLC的發(fā)展的,。本文通過研究發(fā)現(xiàn)OTUD1在NSCLC中下調(diào)并抑制癌細胞,,還發(fā)現(xiàn)OTUD1可以去泛素化并穩(wěn)定KLF4,這種基因在不同癌癥中可以是致癌基因也可以是腫瘤抑制因子,。在本文研究中,,OUTD1通過穩(wěn)定KLF4蛋白抑制NSCLC的發(fā)展,為NSCLC患者治療提供了一個很有希望的治療靶點,。


先看看作者用到哪些組織和細胞,。


  • NSCLC組織和癌旁組織:獲得患者同意并通過倫理審查后,取患者組織于液氮保存?zhèn)溆?,一共6組,;

  • HBE細胞:BEAS-2B細胞(人正常肺支氣管上皮細胞),,SNL-203;

  • A549細胞:A549細胞(人非小細胞肺癌細胞),,SNL-089,;

  • PC9細胞:PC-9細胞(人肺腺癌細胞),SNL-152,;

  • NCI-H1299細胞:NCI-H1299細胞(人非小細胞肺癌細胞),,SNL-223;

  • Calu-3細胞:Calu-3細胞(人肺腺癌(胸水細胞)),,SNL-214,;



使用到的組織和細胞還是比較多,看的出來作者還是比較希望實驗結(jié)果更加準確的,。

接下來就看看作者的實驗結(jié)果吧:

以下僅展示部分細胞實驗結(jié)果(實驗結(jié)果經(jīng)重新調(diào)整,,非原文描述):

作者經(jīng)WB檢測OTUD1蛋白表達量發(fā)現(xiàn),患者癌組織中OTUD1比正常組織低(圖片b,,T為癌組織,,N為癌旁正常組織),細胞系檢測也發(fā)現(xiàn)其在癌細胞中表達明顯低于正常細胞(圖片c),。


圖片


隨后,,又通過轉(zhuǎn)染方式過表達OTUD1方式研究A549與PC9細胞的功能,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過表達(圖片d)后,,細胞增殖活力下降(圖片e),,遷移率下降、侵襲能力降低(f),。


圖片


再通過shRNA沉默OTUD1基因(圖片g),,發(fā)現(xiàn)沉默后的細胞增殖活力上升(圖片h),細胞遷移和侵襲能力升高(圖片i),。


圖片


通過GEPIA數(shù)據(jù)庫篩選,,作者發(fā)現(xiàn)OTUD1與KLF4存在明顯正相關(guān),隨后使用PC-9過表達和敲除OTUD1的細胞研究發(fā)現(xiàn),,敲除OTUD1發(fā)現(xiàn)KLF4半衰期顯著降低,,但敲除和過表達的細胞中KLP4 mRNA表達量卻沒有明顯差異,,說明OTUD1是通過降低KLF4的降解來穩(wěn)定KLF4蛋白的,。進一步的研究發(fā)現(xiàn)OTUD1是通過去泛素化KLF4來穩(wěn)定KLF4蛋白的,限于篇幅,,就不再展示了,,有興趣的童鞋可以查看原文。


原文:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1759-7714.14320。

圖片




本文用到的細胞系,,都是常用的肺相關(guān)細胞,,除CALU-3稍微難培養(yǎng)以外,其他細胞都是比較好培養(yǎng)的:

  1. BEAS-2B細胞(人正常肺支氣管上皮細胞,,SNL-203是從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞,,用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆獲得的,細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性,,是肺癌細胞相關(guān)實驗中常用的對照細胞,;


  2. A549細胞(人非小細胞肺癌細胞,SNL-089,,該細胞系是1972年由GiardDJ通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系的,,源自一位58歲的白人男性。A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂,,角蛋白陽性,,這個細胞大概是比較常用的肺癌細胞了;


  3. PC-9細胞(人肺腺癌細胞,,SNL-152,,該細胞是取自日本患者分化型肺腺癌的細胞,生長時貼壁但仍會有部分圓形細胞,,也是常用的肺腺癌細胞,;


  4. NCI-H1299細胞(人非小細胞肺癌細胞,SNL-223,,這株細胞來源于一個淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,。患者接受了初期放療,。細胞均一性的部分缺失p53蛋白,,并缺少p53蛋白表達,。細胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,,而不合成促胃液釋放肽(GRP) ,;


  5. Calu-3細胞(人肺腺癌(胸水細胞),,SNL-214,該細胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建立的,;該患者曾使用過環(huán)磷酰胺,、博來霉素、阿霉素進行治療,。該細胞接種至裸鼠可成瘤,;可作轉(zhuǎn)染宿主。



END

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