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毛細管電泳分析對進樣技術有哪些要求,?

閱讀:1855      發(fā)布時間:2021-5-17
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電泳儀:專為進行電泳提供外加電場的直流電源,,其輸出電壓或電流或功率要求相對穩(wěn)定或按特定規(guī)律變化,。常用的電泳分析方法主要有:醋酸纖維素薄膜電泳,、凝膠電泳、等電聚焦電泳,、雙向電泳,、毛細管電泳,。其中,,毛細管電泳分析對進樣技術要求很高,,進樣操作事項如下:

1,、進樣區(qū)帶越小越好:

    無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長度的1%~2%,,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性,。樣品管中溶液少為5μL,,進樣體積為1~50nL,。

2,、進樣時間以短為宜:

    通常進樣時間為0.5~1s,,此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。
 雖然毛細管電泳的進樣時間可至±0.1s,,但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液,,進樣時間過短會影響分析的重復性,。

3、樣品預濃縮:

    受毛細管內(nèi)總體積的制約,,對于濃度很稀的樣品,毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大進樣量來提高檢測靈敏度,,但可采取一些措施來改善。
 * 當樣品緩沖液的電導明顯低于(100倍以上)電泳緩沖液時,,毛細管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場,使樣品溶液中的分子遷移的更快,。當這些分子到達電泳緩沖液邊界時,由于電場減弱,,遷移速度減慢,,使樣品區(qū)帶由寬變窄,,濃度提高,,而達到濃縮的目的,。
 * 當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一樣,,而樣品濃度較稀,,不適合再作稀釋時,,可在進樣前先吸入一些水,也能達到濃縮的目的,。
    無論采取何種進樣方式,,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降,,會導致此區(qū)帶溫度升高。

4,、毛細管插入樣品溶液后,,應立即開始進樣操作,,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳,。否則會產(chǎn)生毛細作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬,。

5、電極不要和毛細管接觸,,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡,。

6,、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫,。因溫度直接影響粘度,而影響進樣量的恒定,。

7,、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,,前者的離子強度應低于后者,。

8、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā),、損耗,。



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