昆蟲蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26123

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

昆蟲組織蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲類細胞、組織中提取總蛋白,。提取過程簡單方便,，可在1小時內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,，阻止了蛋白酶對蛋白的降解,，為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白可用于Western Blotting,、蛋白質(zhì)電泳,、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

產(chǎn)品特點：

1. 使用方便,，從昆蟲類細胞,，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融,、超聲破碎等前處理,。

2. 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低,。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑,；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。
該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等,。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
移液器,、吸頭、離心機及離心管,、渦旋振蕩器,、冰箱，冰盒,。

使用方法：

1. 提取液制備：每500μl冷的昆蟲蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物,，4μl蛋白穩(wěn)定劑，混勻后置冰上備用,。

2. 取100mg昆蟲組織樣本剪碎①,，加入昆蟲蛋白提取液。

3. 用勻漿機/勻漿器充分勻漿,。也可用液氮研磨后加入蛋白提取液,。

4. 將勻漿在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
【注】
(1)較低轉(zhuǎn)速保持提取液在晃動即可,。
(2)沒有振蕩條件也可以不振蕩,，保持靜置，稍微延長靜置時間,，中間每隔幾分鐘用吸頭吹打混勻,。

5. 在4℃，12000g條件下離心10分鐘,。

6. 在上清吸入另一預冷的干凈離心管,，即可得到昆蟲總蛋白。

7. 將上述蛋白提取物定量②后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灑邸?/span>
注：
①用液氮研磨的方法更佳,，具體方法可以聯(lián)系本公司索取詳細資料,。
②建議用BCA法進行蛋白定量。
③蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題,。注意不要被蛋白酶水解掉,，不要被細菌污染。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低,？

處理部分組織樣本時可能沒有裂解*,，導致蛋白濃度低。只要適當延長提取液的處理時間即可,。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理,，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白,？

建議用BCA法,。不適合用Bradford法，因為提取液中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準,。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,，則可以用Bradford法定量。

3. 提取時出現(xiàn)膠裝沉淀,？

蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物,。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可,；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒,，超聲3分鐘,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-kappaB,、p53等時，不必進行超聲處理,。

4. 提取的蛋白具有活性嗎,？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷,；所有器具須放-20℃冰箱預冷,。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,，不影響使用,，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品,。

5. Western實驗內(nèi)參可以選用beta-actin,、GAPDH、Tubμlin,。

6. 更多蛋白提取常見問題分析等資料可以聯(lián)系本公司索取。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療,。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失,。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用,，否則會影響使用效果。

4. 最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。

5. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。

保存條件：

蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白穩(wěn)定劑,、蛋白提取液2-8℃保存,。一年有效。