產(chǎn)品名稱：細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：26121

產(chǎn)品包裝：50 次/100 次/200 次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

在研究細(xì)胞時(shí)經(jīng)常要研究細(xì)胞的不同組份，而研究得多的兩個(gè)細(xì)胞組份就是細(xì)胞核和細(xì)胞漿,。分離細(xì)胞核 蛋白和細(xì)胞漿蛋白,，不僅可以用于研究蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，而且很多時(shí)候分離出來(lái)的核蛋白可以用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控 方面的研究,，例如 EMSA(也稱 gel shift),，footprinting 等,。

細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡(jiǎn)單,、方 便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的方法。約 90 分鐘就可以完成培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核蛋 白與細(xì)胞漿蛋白的分離,。抽提得到的蛋白可以用于 Western,，EMSA，footprinting,，報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定 等后續(xù)操作,。

  本試劑盒是通過(guò)細(xì)胞漿蛋白抽提試劑 A 和 B，在低滲透壓條件下,，使細(xì)胞充分膨脹,，然后破壞細(xì)胞膜，釋放 出細(xì)胞漿蛋白,，然后通過(guò)離心得到細(xì)胞核沉淀,。后通過(guò)高鹽的細(xì)胞核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。

產(chǎn)品組成：

試劑名稱 50 次 100 次 200 次 保存條件 Wash Buffer 50mL 100ml 200ml 室溫 Cytoplasmic Extract Buffer 10mL 20ml 40ml 4℃ CE Buffer 5mL 10ml 20ml 4℃ Nuclear Extract Buffer 2.5mL 5ml 10ml 4℃ High Salt Solution 8mL 16ml 32ml 室溫 DTT 溶液 0.25mL 0.5ml 1ml -20℃

操作步驟（僅供參考）：

核蛋白與胞漿蛋白抽提

(以下步驟以 4×10 7 個(gè)細(xì)胞為例,，具體實(shí)驗(yàn)所需量可根據(jù)細(xì)胞數(shù)減倍)

1. 收集 4×10 7 個(gè)細(xì)胞于 1.5mL 離心管中,，用 1mL Wash Buffer 輕輕吹勻，1000rpm 離心去上清,。估算所收集細(xì) 胞體積（Packed Cell Volume,，PCV），通常情況每 4×10 7 細(xì)胞 PCV = 20μL

2. 加入 5 倍 PCV 體積（約 100μL）Cytoplasmic Extract Buffer,，用移液器輕輕吹勻,。

3. 冰上孵育 3min,，4℃ 10000 rpm 離心 4min。

4. 用移液器輕輕收集上清（切勿觸及沉淀）,，所提即為細(xì)胞胞漿蛋白,。

5. 于沉淀中加入用 5 倍 PCV 體積（約 100μL）Cytoplasmic Extract Buffer，用移液器輕輕吹起,，4℃ 12000-14000 rpm 離心 5min,，吸棄上清。

6. 于沉淀中加入 100μL CE Buffer,，用移液器輕輕吹起沉淀,。

7. 加入一倍沉淀體積 Nuclear Extract Buffer（約 50μL），此時(shí)離心管內(nèi)總體積約 200μL,。

8. 加入 35μL High Salt Solution,，渦旋并用移液器重懸沉淀。

9. 冰上孵育 10min,，每隔 2min 渦旋并重懸沉淀,。

10. 4℃ 12000-14000 rpm 離心 10min。

11. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中,，即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白,。可以立即使用,，也可以-70℃凍存,。

12. 對(duì)于新鮮組織核蛋白與胞漿蛋白的抽提

a. 稱取 30-50mg 組織，把組織盡可能切成非常細(xì)小的碎片,，并將組織塊用 1mL Wash Buffer 潤(rùn)洗,，4℃ 1000rpm 離心 3min，吸棄溶液,。

b. 將組織加入并轉(zhuǎn)移至勻漿器中,，加入 1mL Wash Buffer 及 200μL Cytoplasmic Extract Buffer。

c. 在玻璃勻漿器內(nèi)充分勻漿,。勻漿需在冰浴或 4℃進(jìn)行,。

d. 勻漿后把勻漿液轉(zhuǎn)移到塑料離心管內(nèi)，冰浴放置 15 分鐘,。

e. 4℃10000rpm 離心 5 分鐘,。把上清轉(zhuǎn)移至新離心管中，為抽提得到的部分細(xì)胞漿蛋白,。(吸上清時(shí)千萬(wàn)不要觸及 沉淀)

f. 對(duì)于沉淀,，到了這一步已經(jīng)充分勻漿，但很多細(xì)胞還沒(méi)有破碎。按照使用說(shuō)明的步驟 2 開(kāi)始操作,，即把沉淀當(dāng) 做已經(jīng)離心收集好的細(xì)胞沉淀操作,，按照步驟 2 至步驟 11 抽提得到細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白。抽提得到的細(xì)胞 漿蛋白可以和步驟 12e 中抽提得到的細(xì)胞漿蛋白合并,?？梢粤⒓词褂茫部梢?70℃凍存,。

注意事項(xiàng)：

1. 如需提取磷酸化蛋白請(qǐng)?jiān)诔樘嵩噭?Cytoplasmic Extract Buffer/CE Buffer/Nuclear Extract Buffer 中加入磷酸酶 抑制劑,。

2. 所有樣品操作請(qǐng)置于冰上進(jìn)行。

3. 如所提蛋白濃度較低,，可按比例縮小所用溶液體積比例

4. 本試劑盒對(duì)于組織樣品,，僅適合于新鮮組織，對(duì)凍存過(guò)的組織抽提效果很差,。

5. 使用本試劑盒抽提到的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白均可直接用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋 白濃度,。但不適合用 Bradford 法測(cè)定蛋白濃度。

6. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

7. 使用前請(qǐng)于 Cytoplasmic Extract Buffer 中加入 0.4mL DTT 溶液，于 CE Buffer 中加入 0.2mL DTT 溶液,。

8. 可根據(jù)實(shí)際需要增加 Cytoplasmic Extract Buffer 量,，以充分裂解。

保存條件：

-20℃保存,，一年有效,。