半胱氨酸（Cys）含量檢測試劑盒（可見分光光度法）

產(chǎn)品貨號：BA1047

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品內容：

提取液：液體25mL×1瓶,，4℃保存。

試劑一：液體45mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存,。用前1天,，向試劑二中加5mL蒸餾水充分溶解，再加磷酸1.25mL混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h,；冷卻后加20mL 蒸餾水,，4℃可保存2周。

標準品：粉劑×1支,，10mg半胱氨酸,，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

蛋白質含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸,、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）,。其中，Cys是wei一一種含有巰基的含硫氨基酸,，從甲硫氨酸轉化而來，并且可與胱氨酸互相轉化,。Cys參與蛋白質二硫鍵的形成,，經(jīng)常是蛋白質活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應提供巰基,。此外,，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,，并且補充巰基,，以維持皮膚的正常代謝，調節(jié)表皮最下層的色素細胞生成的底層黑色素,。具有美白,、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用,。

Cys還原磷鎢酸生成鎢藍,，在600nm處有吸收峰；通過600nm吸光度,，計算Cys含量,。

需自備的儀器和用品：

低溫離心機、可調式移液槍、可見分光光度計,、1mL玻璃比色皿,、磷酸和蒸餾水。

操作步驟：

一,、半胱氨酸提?。?

1、液體樣品中半胱氨酸提?。喝?span>0.2mL液體樣品,，加提取液0.3mL，充分混勻,，11000rpm4℃離心10min,，取上清液，待測,。

2,、組織中半胱氨酸提取：稱取約0.2g組織,，加入提取液0.5mL,，冰上充分研磨，11000rpm4℃離心10min,，取上清液待測,。

二、測定操作：

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,，調節(jié)波長到600nm,，蒸餾水調零。

2. 標準液的配制：將標準品加入0.826mL蒸餾水,，可得到100µmol/mL的標準液,，稀釋為40、20,、10,、8、2,、1,、0.5、0.25 µmol/mL濃度的標準溶液,。

3. 按下表加入各試劑

三,、樣品中半胱氨酸含量計算：

1,、標準曲線的繪制：

以各標準溶液濃度為x軸,，以?A（A標準管-A空白管）為y軸做標準曲線，得到方程y=kx+b,。 將（A測定管-A對照管）帶入方程求x值,。

2、半胱氨酸含量計算：

（1）按液體樣本的體積計算

半胱氨酸含量（µ mol/mL）=x×V樣總÷V=2.5x

（2）按鮮重計算：

半胱氨酸含量（µ mol/g鮮重）= x×V樣總÷W=0.5x÷W

V：液體樣本體積,，0.2 mL,；V樣總：提取體系體積，0.5mL,；W：樣品質量,，g。