過氧化氫（H2O2）含量檢測試劑盒（硫酸鈦比色法）

產(chǎn)品貨號：BA1543

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

過氧化氫(H2O2)是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生,，由CAT和POD等催化降解,。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐,。生命體內(nèi)積累的H2O2是由一些氧化物催化超氧陰離子發(fā)生氧化還原反應(yīng)而形成,，H2O2相對超氧陰離子性質(zhì)穩(wěn)定，但其存在可以直接或間接導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損害,，加速細(xì)胞的衰老和解體，H2O2也是許多氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,。

過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒(硫酸鈦比色法)其檢測原理是H2O2與硫酸鈦反應(yīng)生成的過氧化物-鈦復(fù)合物黃色沉淀,，溶解于強酸中，其黃色深淺與過氧化氫濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,，可通過比色法檢測 412nm 處吸光度,。該試劑盒主要用于檢測植物組織,、血清、血漿等樣品中過氧化氫(H2O2)含量,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水,、丙酮

2.        勻漿器或研缽

3.        低溫離心機

4.        分光光度計,、比色杯

操作步驟：（僅供參考）

1.  準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織,，清洗干凈,，擦干，切碎,，迅速稱取5g,，加入5ml預(yù)冷的丙酮，在冰浴條件下迅速勻漿或研磨,，4℃ 12000g離心20min,，收集上清液，測量提取液總體積,，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿,、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,，4℃保存,，用于過氧化氫的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的過氧化氫,，可以使用丙酮進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2.  配制10mM H2O2標(biāo)準(zhǔn)溶液：由于過氧化氫不是非常穩(wěn)定,，使用前需自行測定過氧化氫

的實際濃度。本試劑盒提供的H2O2基液的H2O2濃度約為1M,，用蒸餾水稀釋100倍,使H2O2濃度約為10mM,。蒸餾水調(diào)零，分光光度計測定A₂₄₀,，根據(jù)公式H2O2濃度(mM)=22.94×A₂₄₀計算出H2O2基液中H2O2的實際濃度,，再用丙酮稀釋H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液。(一般情況下,，新配制的10mM H2O2基液A₂₄₀為 0.4~0.45,，3個月以后A₂₄₀為0.35~0.42)

按下表依次稀釋(常用濃度0.3-3mM,即1~5號)：

3.  配制硫酸鈦溶液：0.3g硫酸鈦加入6ml蒸餾水中，即為5%硫酸鈦溶液,，4℃保存,。

4.  H2O2加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管,、測定管,，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的H2O2濃度過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定,，樣品的檢測最好能設(shè)置平行管。

5.  H2O2測定：混勻,，室溫放置5min，12000g離心15min,，棄上清液,，留取沉淀，如有必要可加入預(yù)冷丙酮反復(fù)洗滌沉淀物,。向各管的沉淀中加入2ml酸性基液,，搖動，使沉淀*溶解,。比色杯光徑1cm,，空白管調(diào)零，分光光度計測定412nm處各標(biāo)準(zhǔn)管,、測定管的吸光度,，如果沒有分光光度計，亦可用酶標(biāo)儀檢測,。

計算：以系列丙酮-H2O2標(biāo)準(zhǔn)(0.3,、0.5、0.8,、1,、3、5,、8 mM)為橫坐標(biāo),，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，求得回歸方程,。以測定管吸光度代入回歸方程求得待測樣品中H2O2的濃度。

組織樣品H2O2 (mmol/g)=(C₀×V_T×N)/m

液體樣品H2O2 (mmol/L)=C₀×N

式中：C₀=根據(jù)待測樣品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線求得H2O2濃度(mM)

V_T=待測樣品的總體積(L)

m=樣品質(zhì)量(g)

N=樣本稀釋倍數(shù)

注意事項：

1.        本試劑盒亦可用酶標(biāo)儀進行檢測,，但檢測的樣本數(shù)相應(yīng)增加,。

2.        加入堿性基液、硫酸鈦溶液時，應(yīng)直接加入至溶液中,，不要粘到管壁。

3.        過氧化物-鈦復(fù)合物黃色沉淀溶解于酸性基液時需要一段時間,，需*溶解,，否則有可能影響測定結(jié)果。

4.        H2O2基液和堿性基液應(yīng)嚴(yán)格密閉保存,，避免揮發(fā),，否則效率會下降。

5.        H2O2基液和酸性基液有一定腐蝕性,，請小心操作,。

6.        硫酸鈦溶解于水后應(yīng)盡早使用，如暫時不用,，可短期放置4℃冰箱保存,。亦可用分析天平稱取一定量的粉劑，配置5%的濃度即可,。

7.        為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效,。4℃運輸,。