羧酸酯酶（CarE）活性檢測試劑盒（可見分光光度法）

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定,。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1282

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品簡介：

哺乳動(dòng)物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase）,，廣泛分布于組織和器官,，屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵,、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,，但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,，并且與多種藥物,、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),，有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,，固藍(lán)顯色,；在450nm光吸收增加速率，計(jì)算CarE活性,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體50mL×1瓶,，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶,，4℃保存,。用前用20mL無水乙醇充分溶解.

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存,。用前將全部試劑三倒入試劑二瓶中充分溶解,。 

試劑三：液體30mL×1瓶，4℃保存,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、1mL玻璃比色皿,、低溫離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水,。

操作步驟：

一,、粗酶液提取：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)胞（功率20%,，超聲3s,，間隔10s，重復(fù)30次）,；然后15000rpm,，4℃，離心30min,，取上清置于冰上待檢,。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。15000rpm，4℃,，離心30min,，取上清置于冰上待檢,。

血清：直接測量。

二,、測定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、試劑二和試劑一置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上,。

3,、在1mL玻璃比色皿中進(jìn)行如下操作：

迅速混勻后，測定第10s的吸光值記為A1空和A1測,，反應(yīng)3min,，吹打混勻后立即測定190s的吸光值，記為A2空,，A2測,。注意：空白管只需做1~2次。計(jì)算△A空白管=A2空-A1空,，△A測定管=A2測-A1測,。

CarE 活性計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：37℃下，每mL反應(yīng)體系每mg組織蛋白每分鐘催化吸光值增加 1 定義為一個(gè)酶活力單位,。

CarE 酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

= 21.67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：37℃下,，每mL反應(yīng)體系每g組織鮮重每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)酶活力單位。

CarE 酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷（W÷V樣總×V 樣）÷T

=21.67×(△A測定管-△A空白管)÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：37℃下,，每mL反應(yīng)體系每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)酶活力單位,。

CarE 酶活(U/10 ⁴cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷（200÷V細(xì)胞樣總×V樣）÷T

=0.044×(△A測定管-△A空白管)

（4）按血清計(jì)算：

單位的定義：37℃下，每mL反應(yīng)體系每mL血清每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)酶活力單位,。

CarE 酶活(U/mL)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總 ÷V血清÷T

=21.67×(△A測定管-△A空白管),。

V樣總：上清液總體積，1mL,；V樣：加入樣本體積,，0.015 ml；T：反應(yīng)時(shí)間,，3min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量,，g；200：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，200萬,；V 細(xì)胞樣總：細(xì)胞中加入的試劑一體積,，0.4mL；V血清：加入血清體積,，0.4mL,；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.975mL,。

注意事項(xiàng):

1,、動(dòng)物組織樣品一般稀釋10倍進(jìn)行操作測定。

2,、當(dāng)吸光值大于1時(shí),，建議將樣品稀釋后測量。計(jì)算公式注意乘以稀釋倍數(shù),。

3,、建議反應(yīng)時(shí)保持37℃的環(huán)境，逐一比色,，不建議用96孔板同時(shí)測很多樣品,。