總抗氧化能力（T-AOC）檢測試劑盒（可見分光光度法）

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定,。

產(chǎn)品貨號：BA1467

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體50mL×1瓶,，4℃保存，使用前預(yù)冷,。

試劑一：液體35mL×1瓶,，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶,，4℃避光保存,。

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃避光保存,。

標準品：粉劑×1支,，10mgFeSO4·7H2O，4℃保存,。臨用前加入1.75ml蒸餾水,，滴加1滴濃硫酸，制備20µmol/mL FeSO4標準溶液。

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一,、試劑二,、試劑三按7:1:1的比例混合，使用前預(yù)溫至37℃,。

產(chǎn)品說明：

測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學,、醫(yī)學和藥學研究中常常檢測血漿,、血清、唾液,、尿液等各種體液,，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力,。

在酸性環(huán)境下,，還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍色的Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計,、恒溫水浴鍋,、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水,。

操作步驟：

一,、樣品的制備：

(1) 血清、血漿,、唾液或尿液樣品

血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,，不宜使用EDTA抗凝）5000r/min離心10min，取上清待測,。血清,、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定,。

(2) 細胞或組織樣品收集約100-200萬個細胞或者約0.1g組織,，加入1.0mL預(yù)冷的提取液，勻漿或超聲以充分破碎

細胞并釋放其中的抗氧化物,，4℃,、10000r/min 離心5分鐘，取上清待測,。需測定蛋白濃度,。

二測定步驟

1、標準曲線繪制：

將20μmol/mL FeSO4標準溶液稀釋至 0.2,、0.1,、0.05、0.025、0.0125,、0.00625,、0.003125、0.00156μmol/mL,，分別取500μL標準溶液（蒸餾水作空白）加入500μL試劑二,，充分混勻，反應(yīng)10min,，雙蒸水調(diào)零,，1cm光徑，測定A593,，計算ΔA=A標準-A空白,，此時Fe²⁺終濃度為 0.1、0.05,、 0.025,、0.0125、0.00625,、0.003125,、0.00156、0.00078μmol/mL,。

2,、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至593nm,，蒸餾水調(diào)零,。

3、操作表

三,、總抗氧化能力計算

1,、標準曲線繪制

以Fe²⁺終濃度為橫坐標，以△A為縱坐標繪制標準曲線,，得到線性回歸方程y=kx+b,，將△Aˊ帶入方程求得 x(μmol/mL）。

2,、計算公式：

單位定義：樣品的抗氧化能力以達到同樣吸光度變化值（△A）所需的標準液離子濃度表示,。

（1）按蛋白濃度計算

總抗氧化能力（U/mg prot）=x×V反總÷（V樣×Cpr）=34×x÷ Cpr

（2）按樣品質(zhì)量計算

總抗氧化能力（U/g鮮重）=x×V反總÷（V樣÷V樣總×W）=34×x÷ W

（3）按細胞數(shù)量計算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）= x×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）= 34×x÷細胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

總抗氧化能力（U/mL）=x×V反總÷V樣=34×x

V樣總：加入提取液體積,，1mL；V反總：反應(yīng)總體積,，1.02mL,；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.03mL,；W：樣品質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL,；細胞數(shù)量：以10⁴為單位，萬個,。

注意事項：

1.        試劑二對人體有刺激性，請采取適當?shù)姆雷o措施,。為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴乳膠手套操作。

2.        盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的樣本,，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾,。

3.        樣品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑和 DTT,、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑,。

4.        如果樣品測定出來的吸光值在標準曲線范圍以外，需把樣品適當稀釋或濃縮后再進行測定,。

5.        試劑盒2-8℃保存,。