組織細胞RNA提取試劑盒（異硫氰酸胍提取法）產(chǎn)品貨號：11132產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T產(chǎn)品簡介：RNA的種類來源比較多，提取制備的方法各異,，一般有苯酚法,、去污劑法和鹽酸胍法，其中常用的是苯酚法,，即Trizol法提取RNA,。異硫氰酸胍作為強的陰離子表面活性劑，可以有效的解離核蛋白與核酸的復(fù)合體,，并對RNase產(chǎn)生強烈的抑制作用,，保持RNA的完整性。加入氯仿等試劑并離心,，上層清液用異丙醇沉淀回收總RNA。組織細胞RNA提取試劑盒(異硫氰酸胍提取法)適用于從各種組織或細胞中快速分離總RNA,，既可用于小量樣品(50～100mg組織,、5×106細胞)，也可用于大量樣品(>1g組織,、>107細胞),。提取的總RNA質(zhì)量高，可用于N orthernblot,、Dot blot,、polyA篩選、體外翻譯,、RNase保護分析和分子克隆,。本產(chǎn)品具有以下特點：①適用范圍廣；②操作簡單,，整個過程90min內(nèi)完成,；③純度高；④污染少,。產(chǎn)品組成：試劑名稱 50T 100T 保存條件試劑(A): RNA 提取液 30ml 60ml 4℃,，避光試劑(B): 乙酸鈉緩沖液 3ml 6ml 室溫試劑(C): RNA 分離液 30ml 60ml 4℃，避光試劑(D): RNA 沉淀液 30ml 60ml 室溫試劑(E): RNA 洗滌液 50ml 100ml 室溫試劑(F): RNase-free ddH2O 10ml 20ml 室溫試劑(G): RNA 保存液 10ml 20ml 4℃,，避光自備材料：1. 液氮,、研缽或勻漿器2. 經(jīng) RNase free 處理的移液器吸頭,、EP 管等耗材3. 低溫高速離心機、低溫冰箱4. 無菌 PBS 緩沖液操作步驟 (僅供參考) ：1. 實驗準備：RNA 分離液室溫放置 15min 確保兩相分開,，無菌 PBS 緩沖液,、RNA 提取液和 RNA 沉淀液冰上預(yù)冷。2. 樣品準備⑴ 貼壁細胞：①直接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入 RNA 提取液裂解細胞,，每 10cm2面積加 1ml,，用移液器吹打混勻。②胰蛋白酶消化：用無菌 PBS 洗滌細胞后,，加入含有 0.05～0.25 %胰蛋白酶的 PBS 處理細胞,，當(dāng)細胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng),，將細胞溶液轉(zhuǎn)移至無 RNase 的離心管中,，以下參考懸浮細胞相關(guān)操作步驟。⑵ 懸浮細胞：收集(1~5)×106～107動物,、植物和酵母細胞或 107細菌細胞加至 1.5ml 離心管,，5000～6000g 離心5min，用無菌 PBS 重懸細胞沉淀,，再次 5000～6000g 離心 5min 收集細胞沉淀,，去除上清。收集細胞時一定要將溶液去除干凈,，否則裂解不*,，降低 RNA 收獲率。向沉淀中加入加入 0.5ml RNA 提取液,，充分振蕩混勻,。⑶ 組織：取新鮮動物或者植物組織或者-70℃凍存組織，50～100mg 組織在液氮中充分研磨或者加入 0.5ml RNA提取液研磨或者用勻漿器勻漿處理,。樣品體積一般不超過提取液體積的 10%,。研磨要迅速，以 1min 為佳,。⑷ 血液：取 0.5～1ml 新鮮或凍存的血液,，12000g 離心 5min，去除血漿,，加入 0.5ml RNA 提取液,，充分振蕩混勻。3. 核酸分離：將細胞液或勻漿液轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管,，加入 1/10 體積的乙酸鈉緩沖液,，顛倒混勻 5~6 次。加入RNA 分離液,，顛倒混勻 5~6 次后震蕩 10-20s,，冰上放置 15 min,使核蛋白與核酸*分離,。4. 樣品分層：12000 g 4℃離心 10～15min。RNA 在上層水相,。5. 沉淀 RNA：吸取上層水相(約 0.5ml)轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會有染色體DNA 污染),，加入等體積 RNA 沉淀液混勻，冰上放置 10～15 min,。12000 g 4℃離心 10min,，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀，棄上清,。6. 洗滌 RNA：加入 1ml RNA 洗滌液輕輕洗滌沉淀,，冰上放置 5～10min，7500g 4℃離心 5min,，棄上清,。室溫干燥 10～30min，不宜過分干燥,，否則 RNA 難以溶解,。7. 溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free dd H2O 充分溶解，-70℃長期保存或直接用于后續(xù)試驗,。對于肝,、胰腺、腎等組織中 RNase 含量高的樣品沉淀用 RNA 保存液溶解,。注意事項：1. 樣品保存：加入 RNA 提取液混勻后,，樣品可在-70℃放置 1 月；RNA 樣品可以在 70 %酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要長期保存,，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。2. RNA 提取液和 RNA 分離液含有腐蝕性物質(zhì),，污染皮膚或眼睛后,，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)生的幫助,。3. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。有效期：12 個月有效,。常溫運輸,，4℃保存。