產(chǎn)品名稱：細胞,、組織核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26131

操作步驟：

1. 請在蛋白抽提前取出 Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 進行預(yù)冷,。

2. 收集細胞于 1.5ml 離心管中,，3000rpm 離心去上清。估算所收集細胞體積（Packed Cell Volume,，PCV）,。 以下步驟以 100μL 細胞體積為例，具體實驗可根據(jù)細胞數(shù)按相應(yīng)倍數(shù)放大,。

3. 每 100μL PCV 加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer(含 DTT 及蛋白酶抑制劑),，用 10μL 槍 頭輕輕吹勻 20-30 次，避免泡沫,。

4. 冰上孵育 15min (每 5min 用 10μL 槍頭輕輕吹勻 20 次),，4℃2000 rpm 離心 5min。

5. 用移液器吸棄上清,，于沉淀中加入 200μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制 劑),。

a．將沉淀轉(zhuǎn)移至玻璃勻漿器中，冰上勻漿 5-10 次,；或 b.用 1ml 注射器（5 號針頭）反復(fù)吹吸沉淀溶 液 5 次,。

  可選步驟：此時可去少量樣品用臺盼藍染色液染色，未裂解的活細胞不會被染色,，裂解后的可被染色,。

6. 4℃12000-14000rpm 離心 20min。

7. 將上清轉(zhuǎn)移至新 1.5ml 離心管中,，此上清為細胞質(zhì)蛋白,，沉淀為細胞核。

8. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑),，冰上孵育 30min,，每隔 5min 輕 輕上下混勻 10 次。

9. 4℃ 12000-16000rpm 離心 10min,。 10. 收集上清-20℃保存,，此提取液即為細胞核蛋白。

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1. 稱取 50mg 組織,，將組織塊用 PBS 潤洗，吸棄 PBS 并轉(zhuǎn)移至勻漿器中,。

2. 每 50mg 組織加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑),。

3. 冰上勻漿 15-20 次至細胞破碎,。

4. 收集勻漿液，4℃ 12000-14000rpm 離心 20min,。

5. 將上清轉(zhuǎn)移至新 1.5ml 離心管中,，此上清為細胞質(zhì)蛋白，沉淀為細胞核,。

6. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制劑),，冰上孵育 30min，每隔 5min 輕 輕上下混勻 10 次,。

7. 4℃ 12000-16000rpm 離心 10min,。

8. 收集上清-20℃保存，此提取液即為細胞核蛋白,。