糞便基因組DNA提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26225

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒適用于各類糞便樣本的基因組DNA提取,。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,，配合本公司*的緩沖液配方可有效去除動物糞便中各種影響下游實驗的抑制因子，并能高效地回收糞便中的基因組DNA,。提取的DNA純度高,，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種下游應(yīng)用實驗,，如酶切,、PCR、文庫構(gòu)建等,。

產(chǎn)品組成：類別 試劑名稱 50T 100TPart I Proteinase K (20 mg/mL) 1mL 1mL×2Part II緩沖液 AC 5mL 10mL裂解液 LB 70mL 140mL雜質(zhì)去除劑 5mL 10mL去蛋白液 PL 25mL 50mL結(jié)合液 BD 11mL 22mL漂洗液 W 13mL 26mL洗脫液 10mL 20mLDNA 吸附柱 S2 50 個 100 個2mL 收集管 50 個 100 個

實驗前準(zhǔn)備：

1. 自備設(shè)備和試劑：臺式離心機(jī),、振蕩儀、水浴鍋或金屬浴,，1.5mL 離心管,，無水乙醇等。

2. 所有的離心步驟均在室溫完成,，使用可以達(dá)到 12,000 rpm 轉(zhuǎn)速的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)。

3. 使用前,，在漂洗液 W 瓶中加入 4 倍體積的無水乙醇,，充分混勻后使用，并做好標(biāo)記,。如果發(fā)現(xiàn)漂洗液W 由于運輸或保管不當(dāng)造成容量嚴(yán)重不準(zhǔn),，請用量筒定容后再加入 4 倍體積的無水乙醇。每次使用后將瓶蓋蓋緊,，以保持漂洗液 W 中的乙醇含量,。操作步驟：

一、樣本預(yù)處理：

1. 取約 200mg 糞便,，轉(zhuǎn)移至 2mL 離心管中,，并置于冰上。

2. 加入 1.4 mL 裂解液 LB,，渦旋振蕩 1min,，*混勻。注：若糞便樣本為冰凍樣本,，加入裂解液 LB 前,，不宜解凍。注：為保證*混勻,，可適當(dāng)延長渦旋振蕩時間,。

3. 70℃水浴或金屬浴 5min。

注：針對含革蘭氏陽性菌等較難裂解的糞便樣本，可提高溫度至 95℃,。

4. 振蕩混勻 15sec,，室溫放置 1min。12,000rpm 離心 1min 沉淀糞便顆粒,。轉(zhuǎn)移 900μL 上清液,，至 1.5 mL 離心管中。

5. 加入 100μL 雜質(zhì)去除劑,，立即渦旋振蕩至*混勻,。室溫放置 1min，12,000rpm 離心 3min,，去除雜質(zhì),。

6. 轉(zhuǎn)移上清至 1.5mL 離心管中，12,000rpm 離心 3min,。

7. 取步驟 6 中的 210μL 上清液至 1.5mL 離心管中,，加入 20μL Proteinase K (20mg/mL)，充分混勻,。8. 加入 200μL 結(jié)合液 BD,，立刻振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴 10min,。

注：為獲取更高產(chǎn)量,，可以轉(zhuǎn)移更多上清液，同時按比例增加 Proteinase K (20mg/mL),、結(jié)合液 BD 及后續(xù)異丙醇用量,。

二、DNA 提?。?/p>

1. 將 DNA 吸附柱 S2 套入 2mL 收集管中,，備用。

2. 加入 100μL 緩沖液 AC 至 DNA 吸附柱 S2 中,，12,000rpm 離心 1min,，棄掉廢液。

3. 加入 100μL 異丙醇（自備）至上述預(yù)冷后的樣本預(yù)處理混合液中,，立即振蕩混勻,，短暫離心收集管蓋內(nèi)的液體。注：可能會形成絮狀沉淀,，屬于正?，F(xiàn)象。

4. 將上述混合物加入 DNA 吸附柱 S2 中,，12,000rpm 離心 1min,，棄掉廢液,。

5. 加入 500μL 去蛋白液 PL，12,000rpm 離心 30sec,，棄掉廢液,。

6. 將 DNA 吸附柱 S2 放回收集管中，加入 600µL 漂洗液 W,，12,000rpm 離心 30sec,，棄廢液。注：確保漂洗液 W 已添加無水乙醇,。

7. 重復(fù)一遍步驟 6,。

8. 將 DNA 吸附柱 S2 放回收集管，空柱 12,000rpm 室溫離心 2min,，以除去殘留的漂洗液 W,。

9. 將 DNA 吸附柱 S2 放入新的 1.5mL 離心管中，在膜中央加入 50-150µL 洗脫液,，室溫放置 5min,。然后 12,000rpm離心 1min。收集濾液,，即為 DNA 溶液,。

注：可通過以下方式提高回收產(chǎn)量：

①65℃預(yù)熱洗脫液；

②將 DNA 濾液再次上柱,，室溫放置 2min 后,，洗脫。

10. DNA 溶液可置于-20℃長期保存,。

注意事項：

1. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化,、pH 值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

2. 裂解液 LB 和結(jié)合液 BD 低溫時可能析出,，可 70℃溫浴復(fù)溶至溶液澄清,，不影響使用效果。

3. 雜質(zhì)去除劑和結(jié)合液 BD 含有刺激性物質(zhì),，為了您的安全和健康,，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

運輸及保存：

1. Part I 組分冰袋運輸,，4℃可保存 12 個月,，-20℃保存 2 年。

2. Part II 組分常溫運輸,，常溫保存,，有效期 12 個月。