哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒 

產品貨號：11065

 產品規(guī)格：50T/100T

 產品簡介：

 用分子生物學技術研究復雜的基因組,，首先要求制備純凈的高分子質量DNA，一般分為兩個步驟,，先裂解細胞,、溶解DNA，接著采用酶學或化學方法去除蛋白,、RNA以及其他大分子,。

尚寶生物 哺乳動物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經(jīng)典的蛋白酶K處理法，可以抽提到100～150kb以上的基因組DNA,，提取的基因組DNA可用于Southern雜交,、基因組DNA的PCR擴增及基因組DNA文庫的構建等。該試劑盒的提取效率大致為,，從1g組織可以提取到約150～200μg 100kb以上的基因組DNA,，從10 ～10 Hela細胞可以提取到約5～50μg 100kb以上的基因組DNA。該試劑盒僅用于科研領域,，不適用于臨床診斷或其他用途,。

 產品組成：

 試劑盒內容 50T 100T 保存條件試劑(A): 樣品裂解液 50ml 100ml 4℃試劑(B): 蛋白酶K溶液 150μl 300μl -20℃,，避光試劑(C): 乙酸銨溶液 10ml 20ml 室溫試劑(D): Nuclease Free Water 10ml 20ml 室溫自備材料：1. 組織或培養(yǎng)細胞2. PBS3. 無水乙醇,、70%乙醇4. 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇 

操作步驟 (僅供參考) ：

 1. 準備樣品：①組織樣本：切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結,。將 100mg～1g 凍結的組織用預冷的研缽和研杵研碎或用錘子將其搗成碎末,。培養(yǎng)細胞：收集貼壁生長或懸浮生長細胞培養(yǎng)液，貼壁生長細胞需先用胰蛋白酶消化液消化,，再用 PBS 清洗一次,。4℃離心機，1000～2000g 離心 1～2min,，棄上清,。用 1～10ml 預冷的 PBS 再次懸浮離心，如此 2 次洗滌,。

 2. 每 1ml 樣品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液,，混勻。每 50mg 組織或 5×107 細胞用 0.5～0.6ml 樣品裂解液懸浮,，懸浮應*,，不應留下結塊。 

3. 充分混勻,，50℃振蕩下溫育 12～18h 或過夜,。

 4. 加入等體積 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇,，輕輕混合，盡可能減少對 DNA 的剪切,。

 5. 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體),，剩余的水相用等體積酚/氯仿/異戊醇再抽提一次。重復該步驟 1 次,。 

6. 吸取上層液(水溶液)250～300μl 至新 EP 管中,，加入等體積無水乙醇和 1/4 體積的乙酸銨溶液，顛倒混勻數(shù)次,。

 7. 4℃ 10000g 1min,，棄上清。

 8. 加入 70%乙醇,，4℃ 10000g 1min,，棄上清。重復該步驟一次,。

 9. 盡量吸除殘余的乙醇,，空氣干燥，等到不到明顯液體時,，立即加入 50～100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA,，4℃或-20℃保存。注意：不可過分干燥基因組 DNA 沉淀,，否則會極難溶解,。如果發(fā)現(xiàn) DNA 沉淀難以溶解，可以在 4℃用搖床緩慢搖動過夜,，以溶解 DNA 沉淀,。

 10. A 260 /A 280 處檢測 DNA 純度，高純度的 DNA 一般 A 260 /A 280＞1.8,。

 注意事項：

 1. 如果打算提取大片段的基因組 DNA,，應盡量避免基因組 DNA 的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA 的樣品,，可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取基因組 DNA 的樣品,。

 2. 準備細胞樣品時，如果細胞量過少(＜3×107 ),，應 0.3ml 含蛋白酶 K 的樣品裂解液,。

 3. 為避免高分子質量 DNA 被剪切，可以不采用乙醇沉淀 DNA,，可用透析袋替代乙醇：在 100 倍體積的 TE buffer中至少透析 2 次,，所用取全部時間應＞24h。

 4. 不可過分干燥基因組 DNA 沉淀，否則會極難溶解,。5. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 有效期：6 個月有效,。