柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：28104

產(chǎn)品規(guī)格：50次/100次/200次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

　  柱式細(xì)胞基因組提取試劑盒適合于從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中提取高純度總DNA,。本品可純化獲得分子量最大為50 kb的DNA片段,，純化過程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，無需乙醇沉淀,。本試劑盒采用優(yōu)化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結(jié)合到硅基質(zhì)離心吸附柱上,，PCR和其他酶促反應(yīng)的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除，最后使用低鹽緩沖液或水洗脫,，即可得到高純度DNA,。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR,、Real-Time PCR,、文庫構(gòu)建、Southern Blot,、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn),。

包裝清單：

自備試劑：使用前Buffer PW 50次加入36ml無水乙醇/100次加入72ml無水乙醇/200次加入144ml無水乙醇。

操作步驟：

材料處理：

1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液（最大提取量為5×10⁶個(gè)細(xì)胞）,，2000rpm（400×g）離心5分鐘,，棄盡上清，加200 μl Buffer GL,，振蕩至樣品*懸浮,。

2. 如需去除RNA，可在上述步驟完成后,，加入4μl的濃度為100 mg/ml的RNase A溶液,，渦旋15秒。劇烈渦旋震蕩并用移液器吹打充分混勻,，室溫放置5-10分鐘,。

3. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入200μl Buffer PS，12000 rpm離心1分鐘,，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中。

4. 將步驟3所得溶液短暫離心,，全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中,，若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12000 rpm離心1min,，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇）,，12000 rpm離心1分鐘,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中,。  注意：如果純化的DNA用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測(cè)序）,，建議加入Buffer PW靜置2-5分鐘再離心。

6. 重復(fù)步驟5,。

7. 12000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液,。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）,。8.將吸附柱放到一個(gè)新的1.5 ml離心管（自備）中,，向吸附膜中間位置懸空滴加50μl Buffer EB，室溫放置2分鐘,。12000 rpm離心1分鐘,，收集DNA溶液。-20℃保存DNA,。

注意：1）洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響,。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍）,。2）為了提高基因組提取量,，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2分鐘,，12000 rpm離心1分鐘,。3）洗脫體積不應(yīng)小于30μl，體積過少會(huì)影響回收效率,。

注意事項(xiàng) ：

1. 第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇,。

2. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。