高純度質(zhì)粒小提試劑盒

產(chǎn)品貨號：26210

產(chǎn)品規(guī)格：50次/100次/200次

產(chǎn)品簡介：

高純度質(zhì)粒小提試劑盒適合提取1-5 ml菌液,，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上,，采用*的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)和試劑配方，通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,，每個吸附柱最高可吸附30 μg的質(zhì)粒DNA,，并最大限度的去除蛋白質(zhì)、基因組,、RNA和其他雜質(zhì),。得到的質(zhì)粒DNA可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、PCR,、酶切,、測序、連接等生物學(xué)實驗,。

包裝清單：

自備試劑：使用前Buffer PE 50次加入36ml無水乙醇/100次加入72ml無水乙醇/200次加入144ml無水乙醇

操作步驟：

1. 取-5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管（自備）中,，12000 rpm離心30秒收集菌體沉淀，盡量吸棄上清,。

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μl Buffer P1，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻,，懸浮菌體沉淀,。

注意：如果菌塊未*混勻，將會影響裂解效果,，導(dǎo)致提取量和純度偏低,。

3. 向離心管中加入250μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻4-6次,，充分混勻使菌體裂解,，此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠。

注意：溫和混勻,，不要劇烈震蕩,，以免打斷基因組DNA，造成提取的質(zhì)粒中混有基因組DNA片段,。

4. 此步驟所用時間應(yīng)不超過5分鐘,，避免質(zhì)粒受到破壞。

5. 向離心管中加入350μl Buffer N3,，立即溫和地上下顛倒混勻8-10次,，充分混勻，此時應(yīng)出現(xiàn)白色絮狀沉淀,。12000 rpm離心5分鐘,。

注意：Buffer N3加入后應(yīng)立即混勻,，避免產(chǎn)生局部沉淀。

6. 將步驟4中所得的上清液轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns）中,，12000 rpm離心30秒鐘,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中,。

7. 向吸附柱中加入500μl Buffer PB,，12000 rpm離心30秒。

8. 向吸附柱中加入750μl Buffer PE（請先檢查是否已加入無水乙醇）,，12000 rpm離心1分鐘,，倒掉收集管中的廢液。

9. 將吸附柱置于一個新的離心管（自備）中,，向吸附膜的中間部位加入50μl BufferEB,，室溫放置1分鐘，12000 rpm離心1分鐘,，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中,。-20℃保存質(zhì)粒。

注意：

1. 為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,，室溫放置2分鐘，12000 rpm離心1分鐘,，將質(zhì)粒溶液收集到離心管中,。

2. 質(zhì)粒拷貝數(shù)較低或>10 kb時,， Buffer EB在65~70℃水浴預(yù)熱,，可以增加提取效率。

注意事項：

1. 前若發(fā)現(xiàn)Buffer P2,、Buffer N3,、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴幾分鐘,，即可恢復(fù)澄清（請勿劇烈晃動Buffer P2）,。

2. 第一次使用前應(yīng)按照說明在Buffer PE中加入144ml無水乙醇。

3. 注意不要直接接觸Buffer P2 ,、Buffer N3和 Buffer PB,，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。

4. 提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度,、菌株種類,、質(zhì)粒大小、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān),。