Triton X-100細(xì)胞裂解液 

產(chǎn)品貨號(hào)：T15196

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Triton X-100細(xì)胞裂解液是一種經(jīng)典的快速裂解細(xì)胞組織并獲得蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 PAGE電泳,，Western,，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,。Triton X-100,、NaCl、Tris-HCl 等組成,，并含有多種蛋白酶抑制劑成分,，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用,。作用原理是利用去污劑Triton X-100 破壞脂質(zhì)雙分子層,，溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜，破壞分子間微弱結(jié)合鍵的大部分蛋白質(zhì)抗原,。其濃度在0.1%～1%時(shí)即可滿足幾乎所有溶解的需求,，且可補(bǔ)充等離子濃度的鹽及使pH 接近中性。不宜用 Bradford 法測(cè)定由Triton X-100 Lysis Buffer獲得樣本的蛋白濃度,。

產(chǎn)品組成：

操作步驟(僅供參考)：

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

• 取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻,，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM,。
• 去培養(yǎng)液,，用PBS,、NS或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心,，棄上清,，留取沉淀。
• 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer,。移液器輕輕吹打,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi),，細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl,。
• 10000～12000g，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī),，室溫下離心亦可),，取上清。
• 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE,、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞 

• 取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻,，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM,。
• 低速離心懸浮細(xì)胞,，棄上清，收集沉淀,。
• 用手指輕彈細(xì)胞,，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例,，加入尚寶生物Triton X-100 Lysis Buffer ,。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl,。
• 再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,，充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。
• 10000～12000g,，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī),，室溫下離心亦可)，取上清,。
• 進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE,、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

• 取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻后,，加入PMSF,，使PMSF終濃度為1mM。
• 把組織剪切成細(xì)小的碎片,，越小越好,。
• 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨,，研磨過(guò)程盡量控制在1～2min之內(nèi),，以減少蛋白的降解。
• 按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液,。冰上或4℃裂解15～30min,。
• 步驟3、4亦可以采用如下過(guò)程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer,。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,，直至充分裂解，該過(guò)程盡量控制在1～2min之內(nèi),，以減少蛋白的降解,。
• 10000～12000g，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī),，室溫下離心亦可),，取上清。
• 進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western,、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事項(xiàng)：

• 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,，如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,，可以不用清洗。
• 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,，如果需要高濃度的蛋白樣品,，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
• 如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成50～100萬(wàn)細(xì)胞/離心管,，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分,，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,，相對(duì)比較容易裂解充分。
• 如果組織樣品本身非常細(xì)小,，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過(guò)強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。
• 溶解Triton X-100 Lysis Buffer時(shí),，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間，避免有效成分失效,。
• 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-KB、p53等時(shí),，通常不必進(jìn)行超聲處理,，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
• 細(xì)胞裂解的操作步驟,，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行,。

有效期：12個(gè)月有效。