RIPA裂解液（蛋白類）

產(chǎn)品貨號：T16003

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

保存條件：運(yùn)輸 4℃，*保存-20℃

產(chǎn)品簡介：

RIPA裂解液（蛋白類）是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白 樣品可以 用于常規(guī)的 Western,、IP 等。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay,。本產(chǎn)品 RIPA 裂解液的主要成分為 50mM Tris(pH7.4),，150mM NaCl，1% Triton X-100,，1% sodium deoxycholate,，0.1% SDS 等。

操作步驟：

1. 對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1) 對于貼壁細(xì)胞,，去除培養(yǎng)液,，用 PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有 干擾， 可以不洗),。按照每 10 7細(xì)胞加入 200 微升裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞 充分接觸,。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后,，細(xì)胞就會被裂解。

2) 對于懸浮細(xì)胞,，離心收集細(xì)胞,，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照每 10 7細(xì)胞加入 200 微升裂解液 的比例 加入裂解液,。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,，可 適量添加裂解液,。

3) 充分裂解后，10000-14000rpm 離心 5-10 分鐘,，取上清,，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western,、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作,。

2. 對于組織樣品：

1) 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2) 按照每 20 毫克組織加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添 加更多 的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。)

3) 用玻璃勻漿器冰上勻漿,，直至充分裂解。

4) 充分裂解后,，10000-14000rpm 離心 5-10 分鐘,，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE,、Western,、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

5) 如果組織樣品本身非常細(xì)小,，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。 然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

注意事項(xiàng) ：

1. 裂解得到的蛋白樣品,，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用 Bradford 法測定蛋白濃度,，可以選用本公司 生產(chǎn)的 BCA 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度,。

2. 用戶使用前可根據(jù)需要加入蛋白酶抑制劑如 PMSF 或者根據(jù)需要再加入 leupeptin，aprotinin 等其它抑制劑,。

3. 裂解液中 SDS 4℃保存易沉淀析出,，使用前應(yīng)該 37℃-60℃水浴重新溶解*后回復(fù)到室溫使用。

4. 裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行,。