產(chǎn)品名稱：BCA微量蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：34021

產(chǎn)品規(guī)格：1000 次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

BCA微量蛋白定量試劑盒是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一,。本產(chǎn)品是基于 BCA（Bicinchoninic Acid）法研 制而成,，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定,、靈敏的濃度測(cè)定,。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì) 分子中的肽鏈 結(jié)構(gòu)能與 Cu 2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將 Cu 2+還原成 Cu +,。BCA 試劑可敏感特異地與 Cu +結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏 色的復(fù)合物,。在 562 nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,，可根據(jù)吸收值的大小來(lái)測(cè)定 蛋白質(zhì)的含量,。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計(jì)，可準(zhǔn)確測(cè)定濃度為 0.2-100μg/ml 的蛋 白溶液,，試劑盒的靈敏性高,，平行性好，不同種蛋白之間的測(cè)量差異極低,。每個(gè)試劑盒可以檢測(cè) 1000 個(gè)樣 品,。

包裝清單：

產(chǎn)品名稱 包裝 儲(chǔ)存條件 試劑 A 50ml 4℃ 試劑 B 50ml 4℃ 試劑 C 5ml 4℃ 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA) 5mg/ml 1ml -20℃保存

操作步驟：

1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備 取適量 5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用 PBS 稀釋至終濃度為 100μg/ml,。例如取 10μl 5mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn),，加入 490μl PBS 即可配制成 100μg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中,，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋,。但是 為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，也可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)需-20ºC *保存。

2. 工作液配制

根據(jù)樣品數(shù)量,，按 1 體積試劑 C 加 25 體積試劑 B,，混勻后加 26 體積試劑 A，再次混勻（按照 C-B-A 的 順序加,，切勿更改加樣順序）,。配制適量 BCA 工作液,，充分混勻。

3. 蛋白濃度測(cè)定

a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按 0,、5、10,、20,、40,、60、80,、100μl 加到 96 孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中,，加標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋液 補(bǔ)足到 100μl,，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為 0、5,、10,、20、40、60,、80,、100μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品濃度可根據(jù)實(shí) 際實(shí)驗(yàn)需求更改,。

b. 加適當(dāng)體積樣品到 96 孔板的樣品孔中,。如果樣品不足 100μl，需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足 到 100μl,。請(qǐng)注意記錄樣品體積,。

c. 各孔加入 100μl 工作液，60ºC 放置 60 分鐘,。

d. 用酶標(biāo)儀測(cè)定 A562,，或 540-595nm 之間的其他波長(zhǎng)的吸光度。

e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和 A562 值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白 濃度,。

常見(jiàn)問(wèn)題：

1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾 BCA 法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì),。

2. 是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,？ 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?BCA 法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深,，并且顯色反應(yīng)的 速度和溫度有關(guān),，所以除非準(zhǔn)確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需準(zhǔn)確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

注意事項(xiàng)：

  需酶標(biāo)儀一臺(tái),，測(cè)定波長(zhǎng)為 540-595nm 之間，*562nm ,。需 96 孔板,。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用 普通的分光光度計(jì)測(cè)定,，但測(cè)定時(shí),，需根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大 BCA 工作液的用量使不小于 小檢測(cè)體積,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變,。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè) 試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少,。

  如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,，請(qǐng)?jiān)囉?Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

  EDTA 濃度必須小于 10mM,，不兼容 EGTA,。不適用 BCA 法時(shí),，請(qǐng)?jiān)囉?Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。

  本產(chǎn)品*于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi),。

  為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作