單胺氧化酶（MAO）活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1078

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官,，特別是分泌腺,、腦,、肝臟,，在無(wú)脊椎動(dòng)物,、 豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低,，具有重要的生理功能,，其活性能反映肝纖維化的程度。此外,，MAO 活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥,。

MAO 催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,，進(jìn)一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰,，測(cè)定360nm光吸收下降的速率,，計(jì)算MAO活性,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液一：液體100ml×1瓶，4℃保存,。

提取液二：液體100ml×1瓶,，4℃保存。

試劑一：液體60ml×2瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體2ml×1管，4℃避光保存,。

需自備的儀器和用品：

天平,、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔UV板,、蒸餾水。

操作步驟：

一,、粗酶液提?。?/span>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1ml提取液一）進(jìn)行冰浴勻漿,，10000g，4℃,，離心10min,，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管,，10000g,，4℃，離心30min,，棄上清,；加入1.0 mL 預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻,，16000g,，4℃，離心40min,，棄上清,；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL試劑一，震蕩混勻,，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定）,。取上清置于冰上待測(cè)。

2、細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000:1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加1mL提取液一）,，冰浴超聲破碎細(xì)胞（功率300W，超聲3秒,，間隔7秒,，總時(shí)間3min）；然后10000g,，4℃,，離心10min，棄沉淀,；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管,，10000g，4℃,，離心30min,，棄上清；加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二,，震蕩混勻,，16000g，4℃,，離心40min,，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL試劑一,，震蕩混勻,，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測(cè)定）。取上清置于冰上待測(cè),。

3,、血清：直接測(cè)定。

二,、測(cè)定操作表

1,、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至360nm,。

2,、操作表

注意：空白管只需測(cè)定一次。

三,、MAO活性的計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：

1、按蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃,，pH7.6時(shí),，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ mg prot）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 114×△A÷Cpr

2,、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：37℃,，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位,。

MAO活性（U/ g）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 114×△A÷W

3,、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí),，每10⁴個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位,。

MAO活性（U/ 10⁴ cell）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 114×△A÷細(xì)胞數(shù)量

4、按照液體體積計(jì)算

酶活定義：37℃,，pH7.6時(shí),，每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ L）=△A÷?÷d ×V反總÷V樣= 114000×△A

ε：底物摩爾消光系數(shù),，1460L/ mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V反總：反應(yīng)總體積,，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積,，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積，1mL,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，60min,，W：樣本質(zhì)量，g,。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：

1,、按蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí),，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位,。

MAO活性（U/ mg prot）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 228×△A÷Cpr

2,、按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：37℃，pH7.6時(shí),，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位,。

MAO活性（U/ g）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 228×△A÷W

3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：37℃,，pH7.6時(shí),，每10⁴個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。

MAO活性（U/ 10⁴ cell）=△A÷?÷d ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 228×△A÷細(xì)胞數(shù)量

4,、按照液體體積計(jì)算

酶活定義：37℃,，pH7.6時(shí)，每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位,。

MAO活性（U/ L）=△A÷?÷d ×V反總÷V樣= 228000×△A

ε：底物摩爾消光系數(shù),，1460L/ mol /cm；d：比色皿光徑,，0.5cm,；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL,；V樣：反應(yīng)中樣本體積,，0.02mL；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，60min，W：樣本質(zhì)量,，g,。

注意事項(xiàng)：

1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品,，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變,。

2. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。